HER2/neu胞外区基因的克隆与在毕赤酵母中的表达

HER2/neu胞外区基因的克隆与在毕赤酵母中的表达

论文摘要

her2/neu 基因的编码产物是由1255 个氨基酸组成的分子量为185kDa 的受体酪氨酸激酶HER2/neu 蛋白,简称HER2/neu,又称作p185,包括信号肽、胞外区、跨膜区和胞内区四个部分,胞外区(extracellular domain, ECD)是由632 个氨基酸组成的富含半胱氨酸的配体结合功能区。某些肿瘤存在HER2/neu 过度表达,使其成为抗肿瘤治疗的理想靶点。将HER2/neu胞外区蛋白作为肿瘤蛋白疫苗来使用,首先要解决的是来源问题。从肿瘤组织中提取抗原,取材来源有一定限制,难以满足医学研究的需要。重组HER2/neu胞外区是解决上述问题的重要途径。目前尚未见有用毕赤酵母表达HER2/neu 胞外区蛋白的研究报道。鉴于此,本研究选用毕赤酵母作为HER2/neu 胞外区蛋白生产的生物反应器,开展以下工作: 1.本研究构建克隆载体pBS/ECD,经测序证明序列正确,含有完整的人her2/neu ECD基因。以此为基础,可以对her2/neu ECD基因进行提高免疫原性的重组改造,也可以进行基因疫苗的研究。2.本研究构建表达载体pPICZα/ECD,经测序证实含有her2/neu ECD 正确读框结构。用毕赤酵母表达her2/neu ECD 的蛋白经10%SDS-PAGE 电泳分析,在蛋白质分子量110kDa 附近可见一条考马斯亮蓝染色蛋白区带,与HER2/neu ECD 的分子量相符。本研究首次利用毕赤酵母成功表达完整HER2/neu 胞外区的蛋白,为进一步开发肿瘤蛋白疫苗提供实验数据。

论文目录

  • 引言
  • 材料和方法
  • 1. 材料
  • 2. 方法
  • 实验结果
  • 讨 论
  • 实验结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 相关论文文献

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