氨基胍和厄多司坦对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及机制

论文摘要

目的:肺纤维化是以弥漫性、进行性肺间质纤维增生和肺泡结构紊乱,最终导致肺功能障碍为特点的疾病,是多种肺部疾病发展到晚期的共同结局。其预后差,病死率高,仍没有令人满意的治疗方法。临床上仍以糖皮质激素和细胞毒性药物为主,但疗效不确切,且副作用明显。因此,寻找治疗肺纤维化安全有效方法是国内外研究的热点。本实验用氨基胍及氨基胍联合厄多司坦来干预博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠,通过测大鼠肺功能指标:肺活量、肺顺应性,不同时间点肺泡炎、肺纤维化程度,羟脯氨酸（HYP）含量,并与传统的激素治疗方法对比,评价其治疗肺纤维化的效果,及其是否有协同作用。通过测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活力,肺组织匀浆中丙二醛（MDA）的含量及髓过氧化物酶（MPO）的含量,探讨此两种药对肺纤维化可能的作用机制。方法:选取清洁级健康雄性SD大鼠78只,体重250±10g,将其随机分为五组:（1）正常对照组（A）组:6只,生理盐水气管内滴入和灌胃,假手术后第14天全部处死。（2）博莱霉素组（B）组:18只,气管内一次性注入0.2-0.3ml博莱霉素BLM（5mg/kg）制造肺纤维化模型,以生理盐水灌胃。于造模后第7、14、28天各处死6只,分别为B7、B14、B28组。（3）地塞米松组（C）组:18只,气管内注入0.2-0.3mlBLM（5mg/kg）制造肺纤维化模型,造模后第2日开始腹腔注射地塞米松（1mg/kg）一日一次,直至处死,与造模后第7、14、28天各处死6只,分别为C7、C14、C28组。（4）氨基胍组（D）组:18只,气管内注入0.2-0.3mlBLM（5mg/kg）制造肺纤维化模型,于造模开始前两天开始腹腔注射氨基胍（50mg/kg）,一日一次,直至处死,于造模后第7、14、28天各处死6只,分别D7、D14、D28为组。（5）氨基胍+厄多司坦组（E）组:18只,气管内注入0.2-0.3mlBLM（5mg/kg）造模,于造模开始前两天开始腹腔注射氨基胍（50mg/kg）,一日一次,并于造模开始前两天开始用厄多司坦（10mg/kg/天）灌胃,直至处死,于造模后第7、14、28天各处死6只,分别为E7、E14、E28组。各组及各时间点的动物处死前均先行肺功能检查。各组大鼠行心脏放血处死,取右肺组织,用多聚甲醛溶液固定、常规石蜡包埋、切片,分别应用HE染色和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化的动态变化,并进行Szapiel病理分级;左肺组织匀浆后用于检测羟脯氨酸（HYP）含量、丙二醛（MDA）含量、髓过氧化物酶（MPO）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果:1肺功能指标变化1.1肺活量变化（cmH2o）:A组肺活量为（12.23±0.2）。B组3个时间点分别为（6.33±0.13）、（6.13±0.16）、（5.96±0.33）,与A组比较显著下降（P<0.01）。C7组肺活量为（7.06±0.12）,与A组比较显著下降（P<0.01）,但高于B7组（P<0.05）;C14组和C28组肺活量分别为（8.04±0.19）和（8.58±0.26）,分别高于B14组和B28组,差异有显著性（P<0.05）,但低于A组,差异有显著性（P<0.05）.D7组为（8.72±0.21）,低于A组,但高于B7组和C7组,差异有显著性（P<0.05）;D14组为（9.47±0.11）,低于A组,但高于B14组和C14组,差异有显著性（P<0.05）; D28组为（9.67±0.17）,低于A组,但高于B28组和C28组,差异有显著性（P<0.05）。E7组为（8.83±0.25）,低于A组,但高于B7组和C7组,差异有显著性（P<0.05）;高于D7组,但无显著性差异（P>0.05）,E14组和E28组分别为（10.93±0.08）和（11.2±0.10）,高于相应的B14组、C14组、D14组和B28组、C28组、D28组,有显著性差异（P<0.05）,但均低于A组,差异有显著性（P<0.05）。1.2肺顺应性指标变化（ml/cmH2o）:各组大鼠肺顺应性于7天时无明显改变,之后逐渐下降,28天时降到最低,A组肺顺应性为（0.221±0.016）。B7组为（0.188±0.021）,低于A组（P<0.05）,B14和B28组分别为（0.108±0.022）和（0.098±0.024）,低于A组（P<0.01）。C7组为（0.207±0.015）,低于A组、高于B7组,但无显著性差异（P>0.05）,C14组和C28组分别为（0.132±0.038）和（0.128±0.011）,高于相应的B14组和B28组（P<0.05）,但低于A组,有显著性差异（P<0.01）。D7组为（0.210±0.018）,与A组、B7组、C7组相比均无显著性差异（P>0.05）,D14组和D28组分别为（0.186±0.027）和（0.165±0.013）,高于相应的B14组、C14组和D28组、C28组（P<0.05）,但低于A组（P<0.05）。E7组为（0.218±0.028）,与A组和各组7天时间点相比无显著性差异（P>0.05）,E14组为（0.189±0.018）,低于A组、高于B14组、C14组,差异有显著性（P<0.05）,高于D14组,但差异无显著性（P>0.05）,E28组为（0.186±0.009）,低于A组、高于B28组、C28组、D28组（P<0.05）。2肺组织匀浆中HYP含量（ug/mg prot）:A组为（2.18±0.21）。B7组含量为（2.32±0.38）,与A组相比无显著性差异（P>0.05）,B14组和B28组分别为（6.96±0.22）和（8.36±0.27）,与A组相比显著增高（P<0.01）。C7组为（2.30±0.32）,与B7组和A组相比无显著性差异（P>0.05）,C14组和C28组分别为（5.16±0.18）和（7.02±0.19）,与A组比较明显升高（P<0.01）,分别与B14和B28组比较明显下降（P<0.05）。D7组为（2.27±0.33）,与C7组、B7组和A组相比无显著性差异（P>0.05）,D14组为（4.62±0.19）,与A组相比显著升高（P<0.05）,与B14组和C14组相比显著下降（P<0.05）, D28组为（5.93±0.25）,与A组相比显著升高（P<0.05）,与B28组和C28组相比显著下降（P<0.05）。E7组为（2.20±0.30）,与D7组、C7组、B7组和A组相比无显著性差异（P>0.05）,E14组为（4.16±0.17）,与A组相比显著升高（P<0.05）,与B14组相比显著下降（P<0.01）,与C14组和D14组相比也显著下降（P<0.05）。E28组为（4.22±0.23）,与A组相比显著升高（P<0.05）,与B28组比显著下降（P<0.01）,与C28组和D28组相比也显著下降（P<0.05）。3肺组织匀浆中SOD活力（U/mg prot）:B7组SOD活力为（44.34±5.07）与A组（78.83±4.77）比较有显著降低（P<0.01）,之后有所回升,B14组为（58.62±3.98）,仍显著低于A组（P<0.01）,B28组为（72.44±5.16）,与A组无显著差异性（P>0.05）。C7组为（55.12±3.42）,较B7组明显升高（P<0.05）,但仍较A组明显降低（P<0.01）,C14组为（66.33±4.15）,较B14组有所升高,但两组差异无显著性（P>0.05）,较A组显著下降（P<0.05）,C28组仍维持较高水平,为（71.18±5.21）,与B28组和A组比较均无显著差异（P>0.05）。D组中D7组为（65.78±3.47）,较B7组、C7组明显升高（P<0.05）,但仍较A组明显降低（P<0.05）,D14组为（66.91±3.52）,较A组明显下降（P<0.05）,较B14组、C14组有所升高,但差异无显著性（P>0.05）,D28组为（70.85±5.06）,与C28组、B28组和A组比较均无显著差异（P>0.05）。E组中E7组为（69.49±3.53）,较A组显著下降（P<0.05）,较B7组明显升高（P<0.01）,较C7组、D7组也明显升高（P<0.05）,E14组为（69.58±4.12）,较A组明显降低（P<0.05）,较B14组明显升高（P<0.05）,较C14组、D14组有所升高,但差异无显著性（P>0.05）,E28组仍维持较高水平,为（73.38±5.88）,与D28组、C28组、B28组和A组比较均无显著差异（P>0.05）。4肺组织匀浆中MDA含量（nmol/mg prot）:A组MDA含量为（1.02±0.16）。B7组为（2.1±0.18）, B14组为（1.32±0.19）,都较A组明显升高（P<0.05）,B28组为（1.24±0.28）,较A组升高,但差异无显著性（P>0.05）。C7组为（1.34±0.11）,较A组明显升高（P<0.05）,较B7组明显下降（P<0.05）,C14组为（1.24±0.25）,较A组升高,较B14组下降,但差异均无显著性（P>0.05）,C28组为（1.22±0.29）,也较A组升高,较B28组下降,但差异均无显著性（P>0.05）。D7组为（1.28±0.15）,较A组明显升高（P<0.05）,较B7组明显下降（P<0.05）,较C7组下降,但差异无显著性（P>0.05）,D14组为（1.10±0.23）,较A组升高,较B14组、C14组下降,但差异均无显著性（P>0.05）,D28组为（1.09±0.27）,较A组升高,较B28组、C28组下降,但差异无显著性（P>0.05）。E组中E7组为（1.30±0.20）,较A组明显升高（P<0.05）,较B7组明显下降（P<0.05）,较C7组下降D7组升高,但差异无显著性（P>0.05）,E14组为（1.19±0.27）,较A组、D14组升高,较B14组、C14组下降,但差异均无显著性（P>0.05）,E28组为（1.11±0.24）,较A组、D28组升高,较B28组、C28组下降,但差异无显著性（P>0.05）。5肺组织匀浆中MPO含量（u/g prot）:A组MPO含量为（5.67±0.26）。B7组（12.63±0.22）、B14组（10.10±0.21）都较A组明显升高（P<0.01）,B28组为（7.16±0.28）,也较A组明显升高（P<0.05）。C组中C7组为（8.25±0.19）,较A组明显升高（P<0.01）,较B7组明显下降（P<0.05）,C14组为（6.87±0.18）,较A组升高（P<0.05）,较B14组下降（P<0.05）,C28组为（6.29±0.29）,虽较A组升高,较B28组下降,但差异均无显著性（P>0.05）。D组中D7组为（7.42±0.23）,较A组明显升高（P<0.05）,较B7组明显下降（P<0.05）,较C7组下降,但差异无显著性（P>0.05）,D14组为（6.9±0.20）,较A组升高（P<0.05）,较B14组下降（P<0.05）,较C14组上升,但差异无显著性（P>0.05）,D28组为（6.35±0.42）,较A组、C28组升高,较B28组下降,但差异均无显著性（P>0.05）。E组中E7组为（7.11±0.13）,较A组明显升高（P<0.05）,较B7组、C7组明显下降（P<0.05）,较D7组下降,但差异无显著性（P>0.05）,E14组为（6.06±0.37）,较A组升高,较B14组、C14组、D14组下降,但差异均无显著性（P>0.05）,E28组为（6.22±0.38）,虽较A组升高,较B28组、C28组、D28组下降,但差异均无显著性（P>0.05）。6病理结果:B组大鼠表现出肺泡炎和肺纤维化的病理过程,证明造模成功。C组大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度均较B组轻,进行病理半定量分析,C7、C14组肺泡炎程度较B7、B14组显著减轻（P<0.05）,C28组肺纤维化程度较B28组显著减轻（P<0.05）,D组大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度均较C组轻,进行病理半定量分析,D7、D14组肺泡炎程度较C7、C14组显著减轻（P<0.05）,D28组肺纤维化程度较C28组显著减轻（P<0.05）,D组和E组肺泡炎和肺纤维化的程度无显著性差异,进行病理半定量分析,（P>0.05）。结论:1体内氧化-抗氧化失衡在肺纤维化形成过程中发挥重要作用。2氨基胍、厄多司坦对博莱霉素致大鼠肺纤维化有治疗作用,而且其疗效优于传统的激素（地塞米松）疗法,并且氨基胍和厄多司坦对肺纤维化的治疗起协同作用。3氨基胍、厄多司坦治疗肺纤维化的机制可能是通过减少自由基的产生、增加自由基的清除使体内氧化-抗氧化系统恢复平衡;使脂质过氧化损伤减轻;使中性粒细胞积聚减少。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 氨基胍和厄多司坦对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及机制
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 一氧化氮与肺纤维化的研究进展
• 致谢
• 个人简历