蛋白激酶C-βΙ和-δ在脂肪细胞分化中的作用

论文摘要

蛋白激酶C （PKC）是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员,在多种细胞生理功能中起着广泛而重要的作用。然而PKC在脂肪细胞分化中的调节作用仍然不是很清楚。在本工作中,我们研究了几种PKC亚型在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用。3T3-L1前脂肪细胞可经地塞米松,3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和胰岛素诱导分化成为成熟的脂肪细胞。我们发现PKC的非特异性抑制剂R?318220能够抑制3T3-L1的脂肪细胞分化。并且, PKC-α, ?βΙ,和-μ亚型的选择性抑制剂G?6976也抑制3T3-L1的脂肪细胞分化。若用PPARγ的激活剂troglitazone预处理细胞,脂肪细胞的分化不再被G?6976所抑制。在脂肪细胞分化的前两天,PKC-βΙ发生膜转位,而未发现有PKC-α和-μ的膜转位。过量表达PKC-βΙ显性功能失活突变体也抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,但该抑制可以被troglitazone所逆转,提示PKC-βΙ是脂肪细胞分化的早期调控所需要的信号分子。Rottlerin是PKC-δ的专一性抑制剂,能够逆转由TPA,TGFβΙ,和EGF引起的脂肪细胞分化的抑制。这些结果表明PKC-βΙ在诱导脂肪细胞的分化中起着重要作用,而PKC-δ在脂肪细胞分化过程中起着抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 1. 引言
• 1.1 脂肪组织的功能
• 1.2 脂肪细胞的分化
• 1.3 蛋白激酶C 信号通路
• 1.4 蛋白激酶C 对脂肪细胞分化的调节
• 2. 材料和方法
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 3T3-L1 前脂肪细胞的培养，诱导分化
• 2.2 油红染色
• 3H]-胸腺嘧啶核苷掺入'>2.3 [³H]-胸腺嘧啶核苷掺入
• 2.4 细胞蛋白提取液的制备和免疫印记法测定
• 2.5 PKC 转膜实验分析
• 2.6 建立稳定转染细胞株
• 2.7 统计分析
• 3. 结果
• 3.1 Ro318220 和 Go6976 抑制3T3-L1 的脂肪细胞分化
• 3.2 Troglitazone 消除Go6976 对脂肪细胞分化的阻断
• 3.3 脂肪细胞分化过程中PKCβΙ的转膜
• 3.4 过表达PKC-βΙ的显性功能失活突变体基因阻断3T3-L1 前脂肪细胞的分化
• 3.5 Rottlerin 对TPA 介导脂肪细胞分化抑制的逆转效应
• 3.6 Rottlerin 逆转TGFβ和 EGF 对脂肪细胞分化的抑制
• 3.7 Rottlerin 抑制 TGFβ1, EGF, 和TPA 刺激的细胞增殖
• 4. 讨论
• 5. 参考文献
• 6. 综述:脂肪组织的免疫功能
• 7. 在学期间发表的论文
• 8. 致谢