本文主要研究内容
作者黎鹏（2019）在《产烷基间苯二酚的酿酒酵母工程菌株的构建及代谢改造》一文中研究指出：作为1,3-间苯二酚苯环5位被长链烷基取代的一类酚类类脂,烷基间苯二酚(Alkylresorcinols,ARs)是谷物皮层的重要活性成分和标记物,也是粮食行业标准(LS/T3244—2015)评判全麦粉的重要生物标记物。ARs具有抗氧化、抗寄生虫、抗肿瘤、抑菌、降糖降脂等生理活性。目前,大部分的ARs是通过从植物中提取而来,而植物中存在ARs含量低并不能满足市场的需求,本文通过生物合成方法来大量生产ARs。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种代谢背景清晰、基因组已知的真核模式生物,具有良好的耐酸性、遗传操作简便、易培养等优点。本文以酿酒酵母作为表达宿主,将优化后的黑麦(Secale cereale)、高粱(Sorghum bicolor)ARSs基因与pRS42H载体构建重组质粒,并使用LiAc/PEG化学转化法将重组质粒转化酿酒酵母,构建产ARs的重组酿酒工程菌株SN001、SN002和SN003,重组菌株在30℃、YPD培养基中发酵培养,SN001、SN002和SN003重组酵母ARs产量分别是44.5±3.1μg/mL、23.5±2.3μg/mL、28.3±2.9μg/mL。乙酰辅酶A是生物体内重要的活性中间体,为了研究其对酵母中ARs合成与积累的影响,分别在酵母中敲除消耗乙酰辅酶A的支路的基因,并过表达合成乙酰辅酶A的基因。文本敲除MLS1(Malate synthase,MLS1)和CIT2(Citrate synthase,CIT2)基因,考察各突变菌株ARs的合成能力,发现MLS1和CIT2基因单独缺失有利于提高重组酵母菌株对ARs的合成与积累。MLS1基因缺失使SN009、SN011和SN013菌株的ARs最高产量分别为60.9±2.2μg/mL、54.6±3.7μg/mL和50.5±4.3μg/mL,较重组酵母菌株提高了0.4倍、1.3倍、0.65倍。△CIT2基因缺失使SN010、SN012和SN014菌株的ARs最高产量分别是58.7±3.2μg/mL、50.3±2.6μg/mL和63.1±2.1μg/mL,较重组酵母菌株提高了0.56倍、1.19倍、1.22倍。为了进一步提高ARs产量,同时在酿酒酵母中敲除MLS1和CIT2基因,使SN016、SN017和SN018菌株产量分别达到75.4±1.8μg/mL、60.9±1.2μg/mL和68.6±2.6μg/mL,较重组酵母分别提高了0.7倍、1.67倍,1.41倍。以酿酒酵母基因组为模板,分别扩增ACS1(Acetyl-CoA synthetase,ACS1)和DGA1(DiacylGlycerol Acyltransferase,DGA1)基因,将改造后的酿酒酵母表达载体pESC-trp与ACS1和DGA1基因以及目的基因连接构建过表达质粒,然后将过表达质粒转入酵母后构建过表达酵母菌株。研究表明SN020、SN022和SN024菌株产量分别是72.6±3.3μg/mL、51.6±3.2μg/mL、59.3±3.5μg/mL,较重组酵母菌株分别增加了0.6倍、1.2倍、1.1倍。SN021、SN023和SN025菌株产量分别达到54.6±2.9μg/mL、32.8±2.5μg/mL、39.6±3.1μg/mL,较重组酵母菌株提高了0.2倍、0.4倍、0.4倍。本文主要以优化后的黑麦和高粱的ARSs(Alkylresorcinol synthase,ARSs)基因基础,构建产ARSs酿酒酵母工程菌株,研究了不同工程菌生物合成烷基间苯二酚的能力,并进行了初步的代谢改造,为生物合成法制备ARs研究奠定基础。
Abstract
zuo wei 1,3-jian ben er fen ben huan 5wei bei chang lian wan ji qu dai de yi lei fen lei lei zhi ,wan ji jian ben er fen (Alkylresorcinols,ARs)shi gu wu pi ceng de chong yao huo xing cheng fen he biao ji wu ,ye shi liang shi hang ye biao zhun (LS/T3244—2015)ping pan quan mai fen de chong yao sheng wu biao ji wu 。ARsju you kang yang hua 、kang ji sheng chong 、kang zhong liu 、yi jun 、jiang tang jiang zhi deng sheng li huo xing 。mu qian ,da bu fen de ARsshi tong guo cong zhi wu zhong di qu er lai ,er zhi wu zhong cun zai ARshan liang di bing bu neng man zu shi chang de xu qiu ,ben wen tong guo sheng wu ge cheng fang fa lai da liang sheng chan ARs。niang jiu jiao mu (Saccharomyces cerevisiae)shi yi chong dai xie bei jing qing xi 、ji yin zu yi zhi de zhen he mo shi sheng wu ,ju you liang hao de nai suan xing 、wei chuan cao zuo jian bian 、yi pei yang deng you dian 。ben wen yi niang jiu jiao mu zuo wei biao da su zhu ,jiang you hua hou de hei mai (Secale cereale)、gao liang (Sorghum bicolor)ARSsji yin yu pRS42Hzai ti gou jian chong zu zhi li ,bing shi yong LiAc/PEGhua xue zhuai hua fa jiang chong zu zhi li zhuai hua niang jiu jiao mu ,gou jian chan ARsde chong zu niang jiu gong cheng jun zhu SN001、SN002he SN003,chong zu jun zhu zai 30℃、YPDpei yang ji zhong fa jiao pei yang ,SN001、SN002he SN003chong zu jiao mu ARschan liang fen bie shi 44.5±3.1μg/mL、23.5±2.3μg/mL、28.3±2.9μg/mL。yi xian fu mei Ashi sheng wu ti nei chong yao de huo xing zhong jian ti ,wei le yan jiu ji dui jiao mu zhong ARsge cheng yu ji lei de ying xiang ,fen bie zai jiao mu zhong qiao chu xiao hao yi xian fu mei Ade zhi lu de ji yin ,bing guo biao da ge cheng yi xian fu mei Ade ji yin 。wen ben qiao chu MLS1(Malate synthase,MLS1)he CIT2(Citrate synthase,CIT2)ji yin ,kao cha ge tu bian jun zhu ARsde ge cheng neng li ,fa xian MLS1he CIT2ji yin chan du que shi you li yu di gao chong zu jiao mu jun zhu dui ARsde ge cheng yu ji lei 。MLS1ji yin que shi shi SN009、SN011he SN013jun zhu de ARszui gao chan liang fen bie wei 60.9±2.2μg/mL、54.6±3.7μg/mLhe 50.5±4.3μg/mL,jiao chong zu jiao mu jun zhu di gao le 0.4bei 、1.3bei 、0.65bei 。△CIT2ji yin que shi shi SN010、SN012he SN014jun zhu de ARszui gao chan liang fen bie shi 58.7±3.2μg/mL、50.3±2.6μg/mLhe 63.1±2.1μg/mL,jiao chong zu jiao mu jun zhu di gao le 0.56bei 、1.19bei 、1.22bei 。wei le jin yi bu di gao ARschan liang ,tong shi zai niang jiu jiao mu zhong qiao chu MLS1he CIT2ji yin ,shi SN016、SN017he SN018jun zhu chan liang fen bie da dao 75.4±1.8μg/mL、60.9±1.2μg/mLhe 68.6±2.6μg/mL,jiao chong zu jiao mu fen bie di gao le 0.7bei 、1.67bei ,1.41bei 。yi niang jiu jiao mu ji yin zu wei mo ban ,fen bie kuo zeng ACS1(Acetyl-CoA synthetase,ACS1)he DGA1(DiacylGlycerol Acyltransferase,DGA1)ji yin ,jiang gai zao hou de niang jiu jiao mu biao da zai ti pESC-trpyu ACS1he DGA1ji yin yi ji mu de ji yin lian jie gou jian guo biao da zhi li ,ran hou jiang guo biao da zhi li zhuai ru jiao mu hou gou jian guo biao da jiao mu jun zhu 。yan jiu biao ming SN020、SN022he SN024jun zhu chan liang fen bie shi 72.6±3.3μg/mL、51.6±3.2μg/mL、59.3±3.5μg/mL,jiao chong zu jiao mu jun zhu fen bie zeng jia le 0.6bei 、1.2bei 、1.1bei 。SN021、SN023he SN025jun zhu chan liang fen bie da dao 54.6±2.9μg/mL、32.8±2.5μg/mL、39.6±3.1μg/mL,jiao chong zu jiao mu jun zhu di gao le 0.2bei 、0.4bei 、0.4bei 。ben wen zhu yao yi you hua hou de hei mai he gao liang de ARSs(Alkylresorcinol synthase,ARSs)ji yin ji chu ,gou jian chan ARSsniang jiu jiao mu gong cheng jun zhu ,yan jiu le bu tong gong cheng jun sheng wu ge cheng wan ji jian ben er fen de neng li ,bing jin hang le chu bu de dai xie gai zao ,wei sheng wu ge cheng fa zhi bei ARsyan jiu dian ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自江苏科技大学的黎鹏，发表于刊物江苏科技大学2019-07-10论文，是一篇关于烷基间苯二酚论文,酿酒酵母论文,基因敲除论文,过表达论文,江苏科技大学2019-07-10论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自江苏科技大学2019-07-10论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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