论文题目: 中华蜜蜂与意大利蜜蜂乙酰胆碱酯酶生物化学性质比较
论文类型: 博士论文
论文专业: 农业昆虫与害虫防治
作者: 张莹
导师: 黄建
关键词: 中华蜜蜂,意大利蜜蜂,乙酰胆碱酯酶,生物化学性质
文献来源: 福建农林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文以中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricius和意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica Spinola的成年工蜂为研究对象,系统比较了这两种蜜蜂乙酰胆碱酯酶（AChE）的一些生物化学特性及对抑制剂的敏感度,并对其进行了初步纯化。研究结果如下: 1 用正交设计试验方法研究了AChE酶浓度、底物（ATCh）浓度、反应体系的pH、反应温度、反应时间5个因素对意大利蜜蜂头部AChE活性的影响。结果表明,除底物浓度对反应有显著影响外（P<0.05）,其他四个因素对反应都有极显著的影响（P<0.01）,在进行蜜蜂AChE活性测定时需要加以控制。在进行了极差分析、方差分析及多重比较后得到了蜜蜂头部AChE活性测定的最适条件。酶的终浓度为0.2头/mL;底物终浓度为0.8mmol/L;pH为7.5;温度为40℃:时间为5min。 2 研究了中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE活性的体躯分布及头部AChE的亚细胞分布。两种蜜蜂AChE的活性主要分布于头部,分别为65%和65.7%。在头部和腹部两种蜜蜂的分布没有显著差异（P>0.05）,但中华蜜蜂胸部AChE的活性分布比例极显著高于意大利蜜蜂（P<0.01）。两种蜜蜂头部AChE的亚细胞分布趋势一致,中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的活性主要存在于10,000g离心的沉淀（线粒体部分）中,中华蜜峰线粒体部分AChE的活性占其总活性的60%,意大利蜜蜂占其总活性的70%。这两种蜜蜂头部的AChE主要以膜结合的形式存在,超过90%的活性位于有膜的亚细胞结构中（线粒体、微粒体、细胞核及细胞碎片）。 3 比较了两种蜜蜂头部AChE对底物的特异性。根据Km值,中华蜜蜂头部AChE对四种底物亲和性大小的顺序依次为PrTCh>BuTCh>ATCh>MeTCh;意大利蜜蜂为BuTCh>PrTCh>ATCh>MeTCh。Vmax显示,中华蜜蜂头部AChE对四种底物水解效率的高低顺序为MeTCh>ATCh>PrTCh>BuTCh,意大利蜜蜂为ATCh>MeTCh>PrTCh>BuTCh。两种蜜蜂对四种底物亲和性的差异不
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第一章 引言
第一节 乙酰胆碱酯酶研究概况
1.乙酰胆碱酯酶(AChE)的功能
2.胆碱酯酶及AChE的研究历史
3.AChE的分子型
4.AChE的组织分布
5.AChE的结构
6.AChE的基因结构
7.AChE的抑制剂及复能剂
第二节 昆虫AChE的研究概况
1.昆虫AChE的基因结构
2.靶标酶AChE引起的昆虫抗药性
第三节 中华蜜蜂与意大利蜜蜂研究概述
1.蜜蜂种的分布及东方蜜蜂和西方蜜蜂的生物学特性
2.蜜蜂的经济价值及农药对蜜蜂的影响
3.国内外蜜蜂AChE的研究现状及对蜜蜂AChE研究的意义
4.结语
第二章 正交试验法确定意大利蜜蜂头部AChE反应的最适条件
1 材料和方法
1.1 供试虫源
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
1.4 0.1mol／L磷酸缓冲液的配制
1.5 0.4mmol／L DTNB试剂的配制
1.6 考马斯亮兰G-250染色液的配制：
1.7 酶液制备
1.8 AChE活性测定
1.9 蛋白质含量测定
1.10 正交设计
1.11 蜜蜂头部AChE比活力的测定
2 结果与分析
2.1 蜜蜂头部AChE比活力测定
2.2 正交试验结果的极差分析
2.3 正交试验结果的方差分析
2.4 实验因素各水平间的多重比较
3 讨论
第三章 中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE生物化学性质的比较研究
第一节 中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE的活性分布
1 材料和方法
1.1 供试虫源
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
1.4 酶液制备
1.5 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部、胸部、腹部AChE活性的测定
1.6 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的亚细胞分布
1.7 蛋白质含量测定
2 结果与分析
2.1 中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE体躯分布的比较
2.2 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE亚细胞分布的比较
3 讨论
第二节 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的底物特异性
1 材料和方法
1.1 供试虫源
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
1.4 酶液制备
1.5 米氏常数(K_m)和最大反应速率(V_(max))的测定
2 结果与分析
2.1 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE底物特异性的比较
3 讨论
第三节 中华蜜蜂和意大利蜜蜂头部AChE的抑制动力学研究
1 材利和方法
1.1 供试虫源
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
1.4 酶液制备
1.5 抑制动力学常数的测定
1.6 抑制时间进程曲线
2 结果与分析
2.1 抑制时间进程曲线的测定
2.2 抑制动力学常数的测定结果
3 讨论
第四章 中华蜜蜂和意大利蜜蜂AChE分离纯化的初步研究
1 材料和方法
1.1 供试虫源
1.2 化学试剂
1.3 仪器设备
1.4 纯化缓冲液的配制
1.5 酶液制备
1.6 PEG分级沉淀
1.7 层析柱参数
1.8 层析柱装柱、上样及洗脱方法
1.9 AChE纯化方法
1.10 AChE活性测定方法
1.11 蛋白质含量测定
2 结果与分析
2.1 PEG双水相萃取
2.2 Sephadex G-200纯化结果
3 讨论
第五章 总结与讨论
参考文献
致谢
发布时间: 2005-09-27
参考文献
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