低钙饮食/去卵巢对大鼠维生素D内分泌系统的影响以及刺桐、女贞子抗骨质疏松作用与机制的研究

论文摘要

本论文考察了去卵巢（OVX）引起的雌激素缺乏或／和低钙饮食（LCD）对大鼠骨特性、维生素D内分泌系统的影响，并以OVX大鼠作为绝经后妇女骨质疏松模型，探讨了中药刺桐、女贞子对骨质疏松的防治作用及作用机理。 实验结果表明，OVX与LCD分别提高大鼠尿钙排泄、尿磷排泄，并都降低大鼠骨钙含量、松质骨骨密度，对皮质骨的骨量没有影响。OVX降低股骨中段材料力学性能，LCD对骨生物力学性能没有显著影响。两个因素的联合作用明显加重大鼠骨质疏松程度。双因素方差分析显示，OVX提高血清PTH含量以及肾脏1-OHase基因表达，LCD提高血清1,25（OH）2D3含量，肾脏1-OHase、小肠TRPV6、CaBP-9k的基因表达，以及肾脏1-OHase、骨VDR的蛋白表达。说明LCD及OVX分别引起大鼠维生素D系统发生适应性变化及病理性变化。 采用MTT方法对多种中草药体外抗骨质疏松活性筛选实验表明，刺桐提取物在20μg／ml浓度下具有良好的促进大鼠成骨样细胞UMR106增殖活性，增殖率大于30％。接下来采用OVX大鼠作为绝经后妇女骨质疏松模型，研究刺桐的体内抗骨质疏松作用及作用机制。实验结果表明刺桐（600mg／kg、300mg／kg，i.g.）、女贞子（550mg／kg，i.g.）持续给药14周，显著抑制OVX大鼠的尿钙排泄，降低OVX大鼠的高骨转换，改善股骨力学性能，对体重、子宫重没有影响。另外，组织形态计量学考察发现，刺桐能够提高骨小梁厚度、面积百分比，缩小骨小梁之间的间隙，改善松质骨微观结构。进一步通过RT-PCR对基因表达的分析发现刺桐的抗骨质疏松功效可能与其提高小肠近端VDR及肾脏CaBP-9k的基因表达有关。另外，使用HPLC对血清成分的初步定性分析，结果表明，提取物中所含大量异黄酮类物质并且在体内有代谢物染料木素产生可能是刺桐体内抗骨质疏松作用的物质基础。 本文还对补肾中药女贞子对大鼠钙平衡的影响作了初步探讨，结果发现女贞子显著提高OVX大鼠骨无机质、骨钙含量，提高钙平衡及钙吸收率。考察女贞子对正常大鼠及OVX大鼠在各种饮食钙水平下的作用，发现在LCD、中钙饮食（MCD）条件下，女贞子提高长骨中段及椎骨的骨量，改善OVX大鼠的骨力学强度；在MCD、高钙饮食（HCD）条件

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语说明
• 绪论
• 第一章 低钙饮食／去卵巢对大鼠骨特性的影响
• 前言
• 第一节 实验材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 动物
• 1.2 饲料
• 1.3 试剂盒
• 1.4 主要仪器
• 2.实验方法
• 2.1 手术处理
• 2.2 动物分组
• 2.3 动物取材
• 2.4 血液生化指标测定
• 2.5 尿液生化指标测定
• 2.6 骨无机质含量测定
• 2.7 骨密度测定
• 2.8 三点弯曲生物力学测定
• 2.9 统计方法
• 第二节 实验结果
• 1.动物体重变化及子宫系数
• 2.血、尿生化指标
• 2.1 血钙、血磷及尿钙、尿磷含量
• 2.2 骨转换指标
• 3.骨特性指标
• 3.1 骨无机质含量
• 3.2 胫骨近端骨量及骨形态学
• 3.3 胫骨中段骨量及骨形态学
• 3.4 股骨结构力学性能
• 3.5 股骨材料力学性能
• 第三节 讨论
• 小结
• 第二章 低钙饮食／去卵巢对大鼠维生素D系统的影响
• 前言
• 第一节 实验材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 试剂盒
• 1.3 主要仪器
• 1.4 引物碱基序列
• 2.实验方法
• 2.1 血清钙调激素含量测定
• 2.2 抽提组织总RNA
• 2.3 检测RNA纯度及含量
• 2.4 反转录（reverse transcript,RT）
• 2.5 实时荧光定量多聚酶链反应（FQ-PCR）
• 2.6 免疫印迹法分析蛋白
• 2.7 统计方法
• 第二节 实验结果
• 1.血清钙调激素含量
• 2.肾脏维生素D代谢酶基因表达
• 3.肾脏维生素D代谢酶蛋白表达
• 4.小肠钙转运基因表达
• 5.骨维生素D受体蛋白表达
• 2D₃与小肠钙转运基因的相关性分析'>6.血清1,25（OH）₂D₃与小肠钙转运基因的相关性分析
• 第三节 讨论
• 小结
• 第三章 刺桐、女贞子防治去卵巢大鼠骨质疏松作用研究
• 前言
• 第一节 实验材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 细胞
• 1.2 动物
• 1.3 中药提取物
• 1.4 药品与试剂
• 1.5 主要仪器
• 2.实验方法
• 2.1 以成骨样细胞（UMR106）为模型筛选中草药提取物抗骨质疏松活性
• 2.1.1 细胞培养
• 2.1.2 活性筛选
• 2.2 以去卵巢大鼠动物模型研究刺桐、女贞子抗骨质疏松活性
• 2.2.1 手术处理
• 2.2.2 动物分组
• 2.2.3 动物取材
• 2.2.4 血液生化指标测定
• 2.2.5 尿液生化指标测定
• 2.2.6 骨组织形态学测定
• 2.2.7 三点弯曲生物力学测定
• 2.2.8 骨无机质含量测定
• 2.2.9 粪钙测定
• 2.2.10 钙平衡计算
• 2.2.11 统计方法
• 第二节 实验结果
• 1.体外筛选中药抗骨质疏松活性
• 1.1 细胞观察
• 1.2 部分中草药浸膏对成骨样细胞增殖作用的影响
• 2.刺桐、女贞子体内抗骨质疏松活性
• 2.1 大鼠体重变化及子宫系数
• 2.2 刺桐、女贞子提取物对血、尿钙、磷含量的影响
• 2.3 刺桐、女贞子提取物对骨转换指标的影响
• 2.4 刺桐提取物对胫骨组织形态学的影响
• 2.5 刺桐、女贞子提取物对股骨生物力学的影响
• 2.6 女贞子提取物对骨钙含量的影响
• 2.7 女贞子提取物对钙平衡的影响
• 第三节 讨论
• 小结
• 第四章 刺桐防治去卵巢大鼠骨质疏松作用机理研究
• 前言
• 第一节 实验材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 2.实验方法
• 2.1 抽提组织总RNA
• 2.2 制备cDNA链
• 2.3 常规多聚酶链反应（PCR）
• 2.4 HPLC分析血清成分
• 3.统计方法
• 第二节 实验结果
• 1.大鼠小肠基因表达
• 1.1 维生素D受体（VDR）mRNA表达
• 1.2 钙结合蛋白（CaBP-9k）mRNA表达
• 2.大鼠肾脏基因表达
• 2.1 维生素D受体（VDR）mRNA表达
• 2.2 钙结合蛋白（CaBP-9k）mRNA表达
• 3.大鼠血清成分分析
• 第三节 讨论
• 小结
• 第五章 女贞子对不同饮食钙水平雌性大鼠的作用
• 前言
• 第一节 实验材料与方法
• 1.实验材料
• 1.1 动物
• 1.2 中药提取物
• 1.3 饲料
• 1.4 试剂盒
• 1.5 主要仪器
• 2.实验方法
• 2.1 手术处理
• 2.2 动物分组
• 2.3 动物取材
• 2.4 血液生化指标测定
• 2.5 尿液生化指标测定
• 2.6 骨密度测定
• 2.7 三点弯曲生物力学测定
• 2.8 粪钙测定
• 2.9 钙平衡计算
• 2.10 小肠基因表达
• 2.11 统计方法
• 第二节 实验结果
• 1.血清钙调激素含量
• 2.骨密度
• 2.1 胫骨
• 2.2 椎骨
• 3.结构力学
• 4.钙平衡
• 5.小肠基因表达
• 第三节 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历及学术成果