论文摘要
一、IL-1β及TNF-α对大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMC）内皮脂肪酶表达水平的影响目的:观察IL-1β及TNF-α对RASMC EL表达的影响。方法:采用贴块法原代培养RASMC,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。选用第3-5代细胞进行实验,研究对象随机分为三组:⑴空白对照组（不加干预措施原培养液继续培养）;⑵IL-1β干预组:①不同浓度IL-1β干预组:分别以终浓度为1、5、10、20、30ng/mL的IL-1β与RASMC作用24小时;②不同时间IL-1β干预组:终浓度为30ng/mL的IL-1β与RASMC分别作用1、6、12、18、24、48、72小时;⑶TNF-α干预组:①不同浓度TNF-α干预组:分别以终浓度为5、10、15、20、50ng/mL与RASMC作用24小时;②不同时间TNF-α干预组:终浓度为50ng/mL的TNF-α与RASMC分别作用1、6、12、18、24、48、72小时。用ELISA与RT-PCR方法分别检测RASMC的EL蛋白及mRNA表达水平。结果:1.细胞鉴定:荧光显微镜下可见细胞胞浆内均呈现绿色荧光,即胞浆内表达α-肌动蛋白,符合平滑肌细胞特征。2.上清液LDH活性检测结果显示,IL-1β50ng/mL组（102.31±2.35）和TNF-α100ng/mL组（134.56±1.78）显著高于空白对照组（70.17±2.13）（P<0.05）,其余实验组与空白对照组的LDH活性无统计学差异（P>0.05）。说明50ng/mL IL-1β和100ng/mL TNF-α对细胞有毒性作用。在接下来的实验中排除这两个浓度值。3.IL-1β及TNF-α对RASMC EL蛋白表达水平的影响⑴不同浓度IL-1β及TNF-α对RASMC EL蛋白表达水平的影响:①RASMC经不同浓度IL-1β诱导24小时后,EL蛋白表达水平分别为39.67±1.71、61.82±3.59、83.84±2.97、105.70±1.59、114.77±1.17ng/mL,与对照组34.17±1.73 ng/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）,各浓度组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。EL蛋白表达水平随IL-1β浓度的增加呈上升趋势（较对照组分别增加了16.10%、80.92%、145.36%、209.34%、235.88%）,发现在5～20ng/mL之间EL蛋白表达水平显著升高,之后缓慢上升,至30ng/mL达最高浓度值。②RASMC经不同浓度TNF-α诱导24小时后,EL蛋白表达水平分别为39.63±1.10、61.49±1.90、76.36±2.15、93.63±1.52、104.31±2.33ng/mL,与对照组34.17±1.73 ng/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）,各浓度组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。EL蛋白表达水平随TNF-α浓度的增加呈上升趋势（较对照组分别增加了15.98%、79.95%、123.47%、174.01%、205.27%）,发现在10～20ng/mL之间EL蛋白表达水平显著升高,之后缓慢上升,至50ng/mL达最高浓度值。⑵IL-1β及TNF-α对RASMC作用不同时间后EL蛋白表达水平的影响:①RASMC经终浓度为30ng/mL IL-1β诱导不同时间后,EL蛋白表达水平分别为37.46±1.40、47.17±1.11、57.12±1.70、88.74±1.74、114.77±1.17、119.69±1.35、125.18±1.13ng/mL,各时间组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。EL蛋白表达水平随时间延长呈上升趋势（分别较前一个时间点增加了25.92%、21.09%、21.20%、55.36%、29.33%、4.29%、4.59%）。发现在12～24h之间EL蛋白表达水平升高显著,之后缓慢上升,至72h达最高浓度值。②RASMC经终浓度为50ng/mL TNF-α诱导不同时间后,EL蛋白表达水平分别为37.46±1.40、47.17±1.11、53.97±1.08、80.90±1.06、104.31±2.33、116.34±0.84、125.51±1.73ng/mL,各时间组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。EL蛋白表达水平随时间延长呈上升趋势（分别较前一个时间点增加了25.92%、21.09%、21.20%、55.36%、29.33%、4.29%、4.59%）。发现在12～24h之间EL蛋白表达水平升高显著,之后缓慢上升,至72h达最高浓度值。4. IL-1β及TNF-α对RASMC ELmRNA水平的影响⑴不同浓度IL-1β及TNF-α对RASMC ELmRNA水平的影响:①RASMC经不同浓度IL-1β诱导24h后,RASMC ELmRNA表达呈剂量依赖性上调,分别为:0.458±0.018、0.681±0.015、0.787±0.019、0.856±0.023、0.936±0.017,与对照组0.387±0.02比较差异有统计学意义（P<0.05）;各浓度组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。②RASMC经不同浓度TNF-α诱导24h后,RASMC ELmRNA表达呈剂量依赖性上调,分别为:0.498±0.028、0.591±0.035、0.697±0.039、0.812±0.021、0.915±0.021,与对照组0.387±0.02比较差异有统计学意义,P<0.05);各浓度组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。⑵IL-1β及TNF-α对RASMC作用不同时间后ELmRNA水平的影响:①RASMC经终浓度为30ng/mL L-1β诱导不同时间后,ELmRNA表达随时间延长上调,分别为0.458±0.028、0.512±0.024、0.581±0.017、0.772±0.031、0.936±0.017、0.962±0.010、0.976±0.017,各时间组比较差异有统计学意义（P<0.05）。②RASMC经终50ng/mL TNF-α诱导不同时间后,ELmRNA表达随时间延长上调,分别为0.478±0.013、0.535±0.016、0.597±0.018、0.765±0.011、0.915±0.021、0.953±0.015、0.985±0.022,各时间组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:IL-1β、TNF-α均能诱导RASMC EL表达,并且呈时间-剂量依赖性。二、阿托伐他汀（AT）对IL-1β和TNF-α诱导的RASMC EL表达的影响目的:观察AT对炎症因子诱导的RASMC EL表达的影响,进一步探讨他汀类药物的调脂外作用。方法:仍以原代培养的RASMC为研究对象,培养至第3代后分组实验。研究对象分为①对照组:（不加干预措施原培养液继续培养）;②IL-1β（TNF-α）组:加入终浓度为30ng/mL IL-1β或50ng/mL TNF-α与RASMC作用24小时;③AT组:加入AT 10-5mmol/L与RASMC作用24小时;④IL-1β（TNF-α）+AT组:加AT前1小时,先加入终浓度为30ng/mL IL-1β或50ng/mL TNF-α,再加入AT使其终浓度分别为10-7 mmol/L、10-6mmol/L、10-5mmol/L,继续与RASMC培养24小时。用ELISA与RT-PCR方法分别检测EL蛋白及mRNA表达水平结果:1.MTT结果:外源性加入不同浓度的阿托伐他汀后,分别作用3、6、12、24、48h,同对照组相比,细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）。说明干预药物本身对细胞没有毒性作用。2.阿托伐他汀对IL-1β诱导RASMC EL蛋白及mRNA表达的影响:⑴ELISA结果分析显示:随阿托伐他汀给药浓度的增加（10-7、10-6、10-5mmol/L）,IL-1β诱导RASMC EL蛋白表达水平呈下降趋势,其浓度值分别为88.21±1.46、74.13±1.79、69.17±2.36 ng/mL,与对照组（34.17±1.73 ng/mL）、IL-1β组（114.77±1.17 ng/mL）、AT组（24.21±2.45 ng/mL）比较差异均有统计学意义（P<0.05）,各药物干预组之间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。⑵RT-PCR结果分析显示:随阿托伐他汀给药浓度的增加（10-7、10-6、10-5mmol/L）,IL-1β诱导RASMC ELmRNA表达下调,其相对值分别为0.561±0.163、0.503±0.024、0.396±0.126,与对照组（0.387±0.02）、IL-1β组（0.936±0.017）、AT组（0.301±0.202）比较差异均有统计学意义（P<0.05）,各药物干预组之间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。3.阿托伐他汀对TNF-α诱导RASMC EL蛋白及mRNA表达的影响:⑴ELISA结果分析显示:随阿托伐他汀给药浓度的增加（10-7、10-6、10-5mmol/L）,TNF-α诱导RASMC EL蛋白表达水平呈下降趋势,其浓度值分别为80.32±1.07、69.21±1.39、61.15±2.64 ng/mL,与对照组（34.17±1.73 ng/mL）、TNF-α组（104.31±2.33 ng/mL）、AT组（24.21±2.45 ng/mL）比较差异均有统计学意义（P<0.05）,各药物干预组之间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。⑵RT-PCR结果分析显示:随阿托伐他汀给药浓度的增加（10-7、10-6、10-5mmol/L）,TNF-α诱导RASMC ELmRNA表达下调,其相对值分别为0.549±0.143、0.491±0.154、0.423±0.103,与对照组（0.387±0.02）、TNF-α组（0.915±0.021）、AT组（0.301±0.202）比较差异均有统计学意义（P<0.05）,各药物干预组之间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。结论:随着给药浓度的增加,阿托伐他汀呈剂量依赖性抑制IL-1β、TNF-α诱导的EL的表达。
论文目录
相关论文文献
- [1].IL-1β促进肺鳞癌细胞增殖的机制研究[J]. 安徽医科大学学报 2020(02)
- [2].骨髓间充质干细胞对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的抑制作用及其机制[J]. 山西医科大学学报 2020(05)
- [3].丁苯酞对急性脑梗死患者血清IL-1β水平的影响[J]. 淮海医药 2020(03)
- [4].阿霉素促进心脏成纤维细胞分泌IL-1β和Ⅰ型胶原蛋白的机制研究[J]. 中国病理生理杂志 2020(09)
- [5].隐性乳房炎病牛乳清中IL-1β及IL-6变化研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2017(02)
- [6].IL-1β基因-31T/C多态性与川崎病的关联性[J]. 中南大学学报(医学版) 2017(01)
- [7].IL-1及家族成员在心肌炎中的作用研究[J]. 现代生物医学进展 2016(35)
- [8].IL-1β在溃疡性结肠炎中的表达及意义[J]. 南通大学学报(医学版) 2016(05)
- [9].IL-1β、IL-6和IL-18在颅脑损伤患者中的表达及其临床意义[J]. 检验医学与临床 2017(07)
- [10].维生素D联合抗结核药物对老年脊柱结核患者血清IL-1β及干扰素γ水平的影响[J]. 现代生物医学进展 2017(09)
- [11].依达拉奉治疗出血性脑梗死的疗效及其对IL-1β和IL-6的影响[J]. 血栓与止血学 2017(04)
- [12].IL-1β与IL-18在急性肺损伤中的表达及临床意义[J]. 海南医学 2017(12)
- [13].急性小脑出血患者失眠与出血部位、神经损伤程度和IL-1β浓度的关系[J]. 海南医学 2017(16)
- [14].双醋瑞因对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用[J]. 中国现代应用药学 2015(12)
- [15].血清IL-1β及脑源性神经营养因子检测在双相情感障碍患者中的应用[J]. 国际检验医学杂志 2016(14)
- [16].IL-1β及BDNF水平变化与高血压脑出血患者脑水肿的关系[J]. 现代生物医学进展 2016(31)
- [17].清瘀汤对股骨颈骨折人工股骨头置换术后IL-1、IL-6及C-反应蛋白的影响[J]. 中医药导报 2015(03)
- [18].阳和汤对急性乳腺炎患者血清IL-1α、IL-6的影响[J]. 辽宁中医杂志 2015(04)
- [19].IL-1β和IL-6在结直肠癌患者中的表达及意义[J]. 河北医药 2015(18)
- [20].荔枝核皂苷对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞增殖及分泌IL-6、IL-1β的影响[J]. 时珍国医国药 2015(09)
- [21].血清IL-1β、IL-10、MCP-1水平变化对霍奇金淋巴瘤患者早期诊断和疗效预测的价值[J]. 现代肿瘤医学 2020(13)
- [22].IL-1信号通路参与全身型幼年特发性关节炎发病机制的研究进展[J]. 中日友好医院学报 2018(01)
- [23].葛根芩连汤对慢性牙周炎患者IL-1β水平的影响[J]. 国际检验医学杂志 2017(07)
- [24].IL-1家族在神经胶质瘤研究中的作用和意义研究进展[J]. 中国临床研究 2016(03)
- [25].镰刀菌毒素对断奶仔猪肠道IL-1β和IL-6分布和表达的影响[J]. 畜牧兽医学报 2016(10)
- [26].IL-1β在子痫前期早期诊断中的意义[J]. 泰山医学院学报 2015(01)
- [27].痰热清对急性放射性肺炎的干预作用及对(白细胞介素)IL-1影响研究[J]. 大家健康(学术版) 2015(14)
- [28].“改良三甲散”含药脑脊液对Aβ_(25-35)诱导海马神经神经元细胞损伤IL-1α、IL-1β和IL-6的影响[J]. 世界科学技术-中医药现代化 2014(05)
- [29].灵芪胶囊对S_(180)荷瘤小鼠IL-1和IL-6蛋白表达的影响[J]. 中国药师 2013(01)
- [30].实验性动物种植体周围炎龈沟液中IL-1β与IL-6的测定[J]. 中国现代药物应用 2013(04)
标签：内皮脂肪酶论文; 大鼠主动脉平滑肌细胞论文; 阿托伐他汀论文;