论文摘要
目的：利用RNA干扰技术抑制COX3基因表达，观察下调COX3对永生化胃粘膜上皮细胞系（GES-1）及胃癌细胞系（SGC7901）细胞增殖及凋亡的影响，初步探讨COX3基因在胃癌发生中的作用。方法：设计COX3基因的特异性siRNA序列，构建pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-COX3重组质粒（siRNA-COX3质粒），利用Lipofectamine2000分别转染重组质粒（阴性对照质粒、siRNA-COX3质粒）至GES-1及SGC7901细胞，采用半定量RT-PCR检测转染重组质粒后GES-1和SGC7901细胞内COX3mRNA的表达水平，建立COX3基因稳定低表达的细胞系。实验分组为对照组（未转染质粒）、空白组（阴性对照质粒）、干扰组（转染siRNA-COX3质粒），运用细胞计数、平板克隆实验观察COX3基因表达下调对GES-1及SGC7901细胞增殖的影响；利用超氧化物阴离子荧光探针检测细胞内02-，观察COX3基因表达下调后细胞内活性氧水平的变化；采用流式细胞术检测细胞凋亡，观察COX3基因表达下调后对细胞凋亡的影响。结果：重组干扰表达质粒经测序比对，证实与原设计序列完全吻合，脂质体转染至GES-1和SGC7901细胞，RT-PCR检测COX3mRNA，结果显示转染siRNA-COX3质粒组细胞COX3mRNA表达水平明显减弱，从而建立COX3基因稳定低表达的GES-1和SGC7901细胞系。细胞生长曲线显示，GES-1-siRNA-COX3组细胞生长速度显著高于对照组及空白组（p<0.05）；SGC7901-siRNA-COX3组细胞生长速度与对照组及空白组比较，无明显差异（p>0.05）。平皿克隆实验结果显示，GES-1-siRNA-COX3组细胞集落形成力（28.29%）显著高于对照组（18.22%）及空白组（20.43%）（p<0.05）；SGC7901-siRNA-COX3组细胞集落形成力（32.08%）显著高于对照组（20.37%）及空白组（21.84%）（p<0.05）。超氧化物阴离子荧光探针检测发现，GES-1-siRNA-COX3及SGC7901组细胞内O2-水平显著高于对照组及空白组（p<0.05）。细胞流式术检测结果显示，与各自对照组（4.87%、4.56%）及空白组（9.57%、7.70%）比较，GES-1-siRNA-COX3（13.50%）和SGC7901-siRNA-COX3（10.09%）细胞组凋亡率增加，但是经统计学分析，差异无显著性意义（p>0.05）。结论：1. COX3基因表达下调能促进GES-1细胞生长。2. COX3基因表达下调可增加GES-1和SGC7901细胞内活性氧水平。3. COX3基因表达下调对GES-1和SGC7901细胞凋亡影响不明显。
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