论文摘要
目的:探讨端粒酶RNA反义核酸(反义hTR)和端粒酶催化亚单位反义核酸(反义hTERT)分别作用以及联合作用于宫颈癌Hela细胞,对Hela细胞的生长抑制作用及作用机理。 方法:实验分空白对照、脂质体对照、正义hTR、正义hTERT、反义hTR、反义hTERT及反义hTR+反义hTERT组。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、端粒重复序列扩增(TRAP)—逆转录聚合酶链反应技术(PCR)—酶联免疫吸附试验(ELISA)法和端粒重复序列扩增(TRAP)—逆转录聚合酶链反应技术(PCR)—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法、吖啶橙染色法、流式细胞术分别检测端粒酶反义hTR和反义hTERT分别作用及联合作用宫颈癌Hela细胞后,细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞形态学、细胞凋亡和细胞周期的改变。 结果:宫颈癌Hela细胞转染端粒酶反义核酸后,出现明显的细胞增殖抑制、端粒酶活性下降、细胞凋亡形态学改变、凋亡率增高及细胞周期阻滞,与空白对照组、脂质体对照组及正义核酸组比较,统计学上有显著性差异(P<0.01),但反义hTR组和反义hTERT组之间无显著性差异(P>0.05)。反义核酸组细胞出现典型的凋亡形态学改变。Hela细胞转染0.2μmol/L反义hTR+反义hTERT3d后,细胞增殖抑制率、相对端粒酶活性、细胞凋亡率分别为69.3%、19.6%、28.6%,与反义hTR组和反义hTERT组比较(细胞增殖抑制率、相对端粒酶活性、细胞凋亡率分别为hTR:53.8%、37.3%、13.2%;hTERT:56.5%、33.3%、13.7%),有显著性差异(P<0.01)(Q值分别为0.867、0.919、1.075)。反义hTR+反义hTERT组比反义hTR组和反义hTERT组细胞凋亡的形态学改变更明显,反义hTR+反义hTERT组G0/G1期细胞比例增加(G1期细胞比例为57.8%,空白对照组G1期细胞比例为50.7%)。
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