秦岭产荚果蕨总甾酮含量及其醇提物抗氧化活性的研究

论文摘要

荚果蕨Matteuccia struthiopteris（L.）Todaro为球子蕨科荚果蕨属多年生的草本植物,主要分布于山谷林下、溪流附近。荚果蕨营养叶中含有多种蛋白质、维生素、多糖等营养成分,根状茎中富含多种甾酮类物质,是一种集食用、药用、观赏价值于一体的蕨类植物,具有很高的开发利用价值。本实验以荚果蕨全草为研究对象,以总甾酮含量为考察指标,对不同地区、不同采集时间荚果蕨中总甾酮的含量进行测定,并对其醇提物抗氧化活性进行研究,综合评价荚果蕨的化学成分及其药理活性。秦岭地区荚果蕨资源丰富,通过此研究以期为秦岭地区荚果蕨资源的开发利用提供理论及实验依据。已得到的实验结论如下：（1）对荚果蕨中总甾酮的检测波长及提取方法进行优化,确定荚果蕨总甾酮的最佳检测波长为570nm,其中以香草醛-高氯酸为显色剂,冰醋酸为溶剂。最优提取方法为：称取一定量的样品粉末,以1：40的料液比（g/mL）加入相应体积的60%的乙醇,在270W功率条件下超声提取50min,将提取液减压蒸干,用甲醇定容后检测。（2）比较荚果蕨属三种植物中总甾酮的含量,确定总甾酮含量最高的为荚果蕨,与中华荚果蕨（Matteuccia intermedia C. Chr.）和东方荚果蕨（Matteuccia orientalis （Hook.） Trev.）相比差异显著；不同采集时期荚果蕨营养叶中总甾酮含量差异显著,其中9月份含量最高；对不同地区荚果蕨总甾酮含量进行测定,结果显示旬阳坝地区荚果蕨总甾酮含量最高,与其他各地区相比差异显著,不同药用部位总甾酮含量相比根状茎和营养叶中总甾酮含量明显高于孢子叶。（3）对不同产地、不同采集时间荚果蕨乙醇提取物进行体外抗氧化活性研究,结果显示荚果蕨乙醇提取物具有很强的抗氧化活性。不同药用部位提取物对DPPH自由基的清除能力依次为根状茎>营养叶>BHT>孢子叶,对不同地区进行比较的结果为旬阳坝荚果蕨根状茎的清除能力最强,随着采收时间的延长,荚果蕨营养叶提取物的清除活性逐渐增强,9月份样品的清除能力最强。对β-胡萝卜素/亚油酸体系抗氧化能力测定结果显示,各样品在180min之内均有一定的抗氧化能力,各样本间无明显差异。Fe3+还原力的测定中荚果蕨提取物的抗氧化能力随着反应浓度的增加而逐渐增加,当反应浓度大于1.0mg/mL时,样本的抗氧化能力强于BHT,综合比较显示旬阳坝地区荚果蕨的抗氧化能力最强,对5-9月份营养叶提取物的抗氧化能力进行比较发现9月份的抗氧化效果最好。对这三个抗氧化体系中荚果蕨提取物的抗氧化活性进行综合评价,认为旬阳坝地区荚果蕨提取物的抗氧化能力最强,对不同采集时间荚果蕨营养叶的抗氧化活性综合评定认为9月份的抗氧化效果最好。（4）以昆明小鼠为受试动物,以小鼠肝组织和血清中T-SOD活性、MDA含量和T-AOC为检测指标,研究荚果蕨根状茎提取物对小鼠的体内抗氧化作用。对小鼠肝组织各项指标检测发现,在给药量为50mg/kg/d时,小鼠肝组织中T-SOD活性、MDA含量和T-AOC均与正常对照组有极显著差异,说明荚果蕨提取物能够显著的提高小鼠肝组织的抗氧化能力。对小鼠血清中各项指标检测结果显示,在给药量为50mg/kg/d时,小鼠血清中T-SOD活性、MDA含量与正常对照组相比有显著差异,总抗氧化能力（T-AOC）在给药量为200mg/kg/d时与正常对照组差异显著。综合比较认为,荚果蕨根状茎可以明显的提高小鼠体内清除氧自由基的能力,从而减轻小鼠体内受氧自由基攻击造成的细胞损伤,有效的提高小鼠机体的抗氧化能力。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 1.1 荚果蕨的研究概况
• 1.1.1 荚果蕨的生物学性状及自然分布
• 1.1.2 荚果蕨的化学成分
• 1.1.3 荚果蕨的价值
• 1.1.4 荚果蕨目前的研究进展
• 1.2 甾酮类化合物的研究概况
• 1.2.1 甾酮类化合物
• 1.2.2 甾酮类化合物的提取方法
• 1.2.3 甾酮类化合物的研究进展
• 1.3 生物抗氧化活性的研究概况
• 1.3.1 体外抗氧化活性
• 1.3.2 体内抗氧化活性
• 1.3.3 生物抗氧化活性的研究进展
• 1.4 本实验的研究目的及意义
• 第2章 荚果蕨中总甾酮含量的测定
• 2.1 仪器、试剂和实验材料
• 2.2 方法学考察
• 2.2.1 标准品溶液的配制
• 2.2.2 样品溶液的制备
• 2.2.3 检测波长的选择
• 2.2.4 标准曲线的绘制
• 2.2.5 精密度考察
• 2.2.6 重现性考察
• 2.2.7 加样回收率试验
• 2.2.8 显色稳定性考察
• 2.3 提取工艺的优化
• 2.3.1 提取溶剂的选择
• 2.3.2 提取浓度对总甾酮提取率的影响
• 2.3.3 料液比对总甾酮提取率的影响
• 2.3.4 提取时间对总甾酮提取率的影响
• 2.3.5 提取功率对总甾酮提取率的影响
• 2.3.6 正交试验
• 2.3.7 验证性试验
• 2.4 样品中总甾酮含量的测定
• 2.5 结果与讨论
• 2.5.1 荚果蕨属三种植物中总甾酮含量的测定
• 2.5.2 不同采收时期荚果蕨营养叶中总甾酮含量的测定
• 2.5.3 不同产地荚果蕨根状茎中总甾酮含量的测定
• 2.5.4 不同产地荚果蕨营养叶中总甾酮含量的测定
• 2.5.5 不同产地荚果蕨孢子叶中总甾酮含量的测定
• 2.6 小结
• 第3章 荚果蕨醇提物体外抗氧化活性的评价
• 3.1 仪器与试剂
• 3.2 样品的制备
• 3.3 荚果蕨提取物对不同抗氧化体系的测定
• 3.3.1 提取物对DPPH自由基清除活性的测定
• 3.3.2 提取物对β-胡萝卜素/亚油酸抗氧化体系的测定
• 3+还原力的测定'>3.3.3 提取物Fe³⁺还原力的测定
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 对DPPH自由基清除活性的测定
• 3.4.2 对β-胡萝卜素/亚油酸抗氧化体系的测定
• 3+还原力的测定'>3.4.3 Fe³⁺还原力的测定
• 3.5 小结
• 第4章 荚果蕨醇提物体内抗氧化活性的评价
• 4.1 仪器、试剂与材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 样品溶液的制备
• 4.2.2 实验动物的分组及给药、检测
• 4.2.3 丙二醛（MDA）含量测定
• 4.2.4 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性测定
• 4.2.5 总抗氧化能力（T-AOC）的测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 丙二醛（MDA）含量测定
• 4.3.2 总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性测定
• 4.3.3 总抗氧化能力（T-AOC）的测定
• 4.4 小结
• 第5章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间科研成果