突变大肠癌线粒体DNA转染NIH3T3及LST细胞的研究

论文摘要

大肠癌是一种涉及许多相关基因的多因素多阶段的恶性肿瘤,实验表明染色体外存在抑癌因素,维持细胞的肿瘤特性需要线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）的参与。大肠肿瘤的mtDNA改变,国内外少有文献报告,且意见不一,不尽相同。Savre-Train等在结肠癌细胞系Caco-2中检测到2583bp大片段的缺失,缺失为1%,而未检测到碱基突变及线粒体基因组不稳定。Heerdt等研究中,在结肠癌细胞mtDNA的D-loop区存在基因组的多态性,而未发现有mtDNA的突变及mtGI（genetic instability）。而Habano在对45对结肠癌和正常组织的mtDNA的研究中,发现有7/45（16%）存在突变,包括3例编码ND1和ND5的移码突变,2例错义突变,15Kbp的缺失,而没有大片段的缺失,并且进一步研究发现其中22例mtDNA的D-loop区存在（CA）n不稳定及多聚C不稳定。这些研究阐明了在大肠癌细胞中存在mtDNA的改变,但未涉及到mtDNA在大肠癌发生和演变中的作用机制,也未涉及到mtDNA与大肠癌发生有关的癌基因和抑癌基因的内在关系。人类的线粒体基因组是环状、双链DNA,由于mtDNA全长也仅仅16Kb多,而且序列早已完全清楚,只要通过设计适当的引物分别进行PCR和测序即可获得该细胞mtDNA的序列,因此为研究提供了方便。mtDNA分编码区和非编码区,即D-环区。D-环区包括重链的复制起点等重要序列,成为研究热点。本课题组通过PCR及测序等技术分析了人大肠癌细胞株中细胞线粒体DNA变异,包括突变、缺失、DNA不稳定性等,发现通过SW480,LoVo,HT29细胞株

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 突变的大肠癌细胞线粒体DNA的提取与鉴定
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 第二章 人大肠癌及正常人血白细胞线粒体DNA重组表达载体的构建
• 2.1 材料和方法
• 2.2 讨论
• 第三章 变异的mtDNA重组表达载体转染NIH3T3及LST细胞的实验研究
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 附录（中英文缩词对照表）
• 成果
• 致谢
• 原创性说明