论文摘要
研究目的本实验通过川芎嗪、辛伐他汀对高糖作用下人腹膜间皮细胞（HPMC）的干预实验,观察对腹膜纤维化有重要影响的VEGF表达的变化,研究川芎嗪和辛伐他汀以及二者联合对人腹膜间皮细胞保护作用机制,为腹膜纤维化的防治提供一定的理论依据。研究方法由南京市鼓楼医院进行腹腔外科手术非尿毒症且非腹腔炎症捐赠者正常大网膜组织,采用消化组织培养法,培养出人腹膜间皮细胞,第三代细胞用于实验。实验将HPMC分为九组:N组即正常对照组-（RPMI1640培养液）、G组-（2.5%葡萄糖注射液）、S1组（辛伐他汀2.5μmol/L+葡萄糖注射液2.5%）、S2组（辛伐他汀5μmol/L+葡萄糖注射液2.5%）、S3组（辛伐他汀10μmol/L+葡萄糖注射液2.5%）、L1组（川芎嗪10mg/L+葡萄糖注射液2.5%）、L2组（川芎嗪20mg/L+葡萄糖注射液2.5%）、L3组（川芎嗪40mg/L+葡萄糖注射液2.5%）、SL协同组（辛伐他汀10μmol/L+川芎嗪40mg/L+葡萄糖注射液2.5%）,各组以含10%FCS的RPMI1640培养液（完全培养液）补充容量至200μL。以MTT检测细胞活性,ELISA、RT-PCR检测VEGF在蛋白、基因水平的表达。研究结果（1） HPMC培养与鉴定:分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达95%以上;细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原阴性,证实分离培养的确是HPMC。（2） MTT检测细胞活性的比较:高糖能降低人腹膜间皮细胞活力;在辛伐他汀、川芎嗪干预下,HPMC MTT OD值显著高于高糖对照组（P＜0.01）,且其作用随着药物浓度增加而增强;辛伐他汀联合川芎嗪能显著升高HPMC MTT OD值,其作用与辛伐他汀高剂量组无明显差异（P＞0.05）。说明辛伐他汀、川芎嗪均能抑制高糖导致的细胞活力降低,二者联合仅在一定程度上表现出协同作用。（3） ELISA、RT-PCR检测VEGF在蛋白、基因水平表达的比较:HPMC在高糖作用下VEGF表达增加;在辛伐他汀干预下,VEGF表达显著低于高糖对照组（P＜0.01）,且抑制作用呈剂量依赖性（P＜0.01）;在川芎嗪干预下VEGF表达也显著低于高糖对照组（P＜0.01）,也呈剂量依赖性;辛伐他汀联合川芎嗪能显著降低VEGF表达,但其作用与辛伐他汀、川芎嗪高剂量组没有明显差异（P＞0.05）。说明辛伐他汀、川芎嗪可能通过抑制VEGF表达达到对HPMC的保护作用,但二者联合无协同效应。结论1、实验成功分离和培养了人腹膜间皮细胞,为体外研究腹膜透析相关性腹膜纤维化提供了细胞来源。2、在高糖作用下,HPMC细胞活力下降,VEGF表达增加。3、川芎嗪、辛伐他汀干预高糖作用下的人腹膜间皮细胞后,细胞活力恢复,VEGF表达明显减少。4、川芎嗪、辛伐他汀可能通过降低VEGF表达,减少腹膜血管新生和细胞外基质积聚,从而延缓腹膜透析相关性腹膜纤维化的发生、发展。