番红花球茎活性成分分离及其抗肿瘤的研究

论文摘要

恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大难治性疾病,药物治疗在恶性肿瘤的三大疗法中占有重要的地位。目前国内外抗肿瘤药众多,但许多药物疗效不高、毒副反应大,因此继续寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为研究的热点。我国有丰富的药用植物资源,自70年代以来,天然植物抗肿瘤药物的研究开发项目层出不穷。大量的报道也表明绝大多数合成的化学类抗肿瘤药物都是以天然抗癌活性成分为先导化合物的,包括计算机模拟和仿生设计也都是以天然抗癌活性成分为基础的。一般而言,植物来源的抗肿瘤药物毒副作用相对较小,因此利用天然药用植物资源开发拥有自主知识产权的抗肿瘤新药具有广阔前景。现代医学分析指出传统名贵中药番红花(Crocus sativus L.)中含有番红花素(crocin)、番红花酸(crocetin)、番红花醛(safranal)等多种重要的次生代谢产物,且均具有显著的抑癌抗癌能力,但它们的存在部位是柱头,产量极低。而番红花球茎在收获时占绝大部分重量,这促使我们从球茎中寻找具有抗肿瘤效果的活性成分。1999年Escribano等首次从番红花球茎中分离鉴定出一种新型的蛋白聚糖,研究表明其对Hela细胞等具有较强的细胞毒性。本文在他们的基础上进行了一系列的实验重组和改进,前期用DEAE层析柱分离,加长了层析柱的长度(16mm×200mm),并从层析分离上样、流速、分离效率等多个方面进行了评价和优化,使粗产品产率有了显著提高;后期用HPLC进行分离,从洗脱方法、分离效率、分离物质单一程度等方面进行了分析。验证了不同分离组分对HeLa细胞和A549细胞的生长抑制作用。层析柱粗分离时得率为0.231%,HPLC精细分离时得率为19.3%,最终得率为0.045%。本文初步建立了番红花球茎抗肿瘤活性成分的提取方法,实验结果显示番红花球茎活性成分可能是一种有价值的抗肿瘤药物,为以后大规模产业化提取分离提供了可行性模型和数据支持。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.2 国内外文献综述
• 1.2.1 番红花抗癌有效物质的研究进展
• 1.2.2 多糖复合物的研究进展
• 1.3 研究工作的来源意义和目的
• 第二章 实验的设计与测定方法
• 2.1 技术路线
• 2.2 DEAE层析柱分离
• 2.2.1 试剂与仪器
• 2.2.2 分离方法
• 2.3 HPLC分离
• 2.3.1 试剂与仪器
• 2.3.2 实验方法
• 2.4 肿瘤细胞体外抑制试验
• 2.4.1 MTT法
• 2.4.2 SRB法
• 第三章 DEAE层析柱分离
• 3.1 DEAE层析柱分离结果图像分析
• 3.2 DEAE层析柱分离重复试验结果分析
• 3.3 B峰洗脱液浓缩脱盐及冷冻干燥结果
• 3.4 本章小结
• 第四章 HPLC精细分离
• 4.1 SUPELCOSIL LC-304 C4柱的分离结果
• 4.2 伊莱特Hypersil C4柱的分离结果
• 4.3 本章小结
• 第五章 提取物对肿瘤细胞的体外抑制作用
• 5.1 层析柱提取物的肿瘤细胞体外抑制试验
• 5.2 HPLC提取物的肿瘤细胞体外抑制试验
• 5.3 本章小结
• 结论与讨论
• 致谢
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文与专利