贯叶连翘提取物对免疫性心肌炎的治疗作用及其机理研究

论文摘要

背景和目的：贯叶连翘提取物是由本实验室自制得到的,其主要活性成分是金丝桃素。本课题组已有金丝桃素抗柯萨奇病毒性心肌炎的初步研究报道。本文通过心肌肌球蛋白免疫遗传易感性鼠系诱导建立免疫性心肌炎的模型,探讨贯叶连翘提取物对免疫性心肌炎的治疗作用,并初步探讨其作用机制,从而为临床应用提供基础动物实验资料。方法：1.利用超临界C02流体萃取技术提取金丝桃素(贯叶连翘提取物的主要活性成分),并用高效液相法测定其含量。采用响应面实验设计方法,对超临界C02流体萃取的三个因素：萃取温度、萃取压力以及夹带剂浓度(乙醇体积分数)进行优化,得出最佳萃取条件2.急性毒性试验,确定小鼠口服贯叶连翘提取物的最大给药量。3.建立免疫性心肌炎模型,研究贯叶连翘提取物对免疫性心肌炎的治疗作用。结果：1.超临界C02流体萃取金丝桃素的最佳条件是：50.3℃下,体积分数为78.6%的乙醇作动态夹带剂,夹带剂流速0.5 mL/min,C02流速2 L/min,萃取压力25.29 MPa,萃取时间2 h,金丝桃素含量达1.087%。2.小鼠口服贯叶连翘提取物的最大给药量为24 g/kg。3.贯叶连翘提取物能减少心肌穿孔素/颗粒酶B的表达,抑制小鼠心肌组织中NO含量的增加,降低小鼠血清中MDA含量,能提高小鼠血清中的SOD活力,同时降低外周血T淋巴细胞CD4/CD8比例。提示贯叶连翘提取物的抗病机制与抑制穿孔素/颗粒酶B途径,提高机体抗氧化能力有关。结论：贯叶连翘提取物对免疫性心肌炎有一定的治疗作用,不仅可以减轻免疫性心肌炎小鼠心肌炎症程度,还可以缓解心肌免疫损伤,是一种具有较广市场前景的现代中药成分。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 符号说明
• 第一章 文献综述
• 1.1 金丝桃素的来源
• 1.2 Hyp的结构与特性
• 1.3 Hyp的提取
• 1.3.1 传统提取方法
• 1.3.1.1 乙醇提取法
• 1.3.1.2 碱液提取法
• 2流体萃取技术'>1.3.2 超临界CO₂流体萃取技术
• 1.3.3 超声提取技术
• 1.4 Hyp的合成
• 1.4.1 化学合成
• 1.4.2 酶合成
• 1.5 鉴定
• 1.6 含量测定
• 1.6.1 紫外分光光度法
• 1.6.2 反相高效液相色谱法
• 1.6.3 双波长分光光度法
• 1.7 药理作用
• 1.7.1 抗病毒
• 1.7.1.1 抗HIV病毒
• 1.7.1.2 抗H5N1型病毒
• 1.7.1.3 抗FMDV病毒
• 1.7.1.4 抗MCMV病毒
• 1.7.2 抗肿瘤
• 1.7.3 抗抑郁
• 1.7.4 免疫调节功能
• 1.8 本课题立题思路与研究内容
• 2萃取Hyp工艺'>第二章 超临界CO₂萃取Hyp工艺
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 Hyp的萃取
• 2.2.2 Hyp的HPLC分析方法
• 2.2.2.1 色谱条件
• 2.2.2.2 标准曲线的绘制
• 2.2.2.3 Hyp含量的测定
• 2.2.3 单因素实验设计
• 2.2.4 RSD法对工艺参数的优化
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 Hyp含量测定结果
• 2.3.2 单因素实验结果
• 2.3.2.1 萃取温度对含量的影响
• 2.3.2.2 萃取压力对含量的影响
• 2.3.2.3 夹带剂流速对含量的影响
• 2.3.2.4 夹带剂浓度对含量的影响
• 2.3.2.5 萃取时间对含量的影响
• 2.3.3 RSD法对工艺参数的优化
• 2.3.3.1 Hyp提取条件优化
• 2.3.3.2 方程的最优解及最佳条件
• 2.3.3.3 最佳工艺条件的验证实验
• 2.4 本章小结
• 第三章 贯叶连翘提取物急性毒性实验
• 3.1 实验材料和动物
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验动物
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 本章小结
• 第四章 贯叶连翘提取物对免疫性心肌炎的治疗作用
• 4.1 实验材料和仪器
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 实验材料
• 4.1.3 实验仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 实验性自身免疫性心肌炎（experimental autoimmune myocarditis,EAM）模型的制备
• 4.2.1.1 造模药物的制备
• 4.2.1.2 造模分组
• 4.2.1.3 造模方法
• 4.2.2 模型的评估
• 4.2.2.1 间接ELISA法检测小鼠血清中抗肌球蛋白抗体滴度
• 4.2.2.2 石蜡切片检查
• 4.2.3 实验用药分组
• 4.2.4 药物干预
• 4.2.5 标本的采集和处理
• 4.2.6 石蜡切片检查
• 4.2.7 免疫组化法检测心肌组织穿孔素、颗粒酶B的表达
• 4.2.8 外周血T细胞亚群分析
• 4.2.9 间接ELISA法检测小鼠血清中抗肌球蛋白抗体滴度
• 4.2.10 血清超氧化物歧化酶（SOD）测定
• 4.2.11 血清MDA测定
• 4.2.12 心肌组织中NO测定
• 4.2.13 统计学处理
• 4.3 结果
• 4.3.1 贯叶连翘提取物对小鼠心脏、脾脏指数的影响
• 4.3.2 HE染色
• 4.3.3 免疫组化检测心肌组织穿孔素（PFP）的表达
• 4.3.4 免疫组化检测心肌组织颗粒酶B的表达
• 4.3.5 外周血T细胞亚群的分析
• 4.3.6 间接ELISA法检测小鼠血清中抗肌球蛋白抗体滴度
• 4.3.7 贯叶连翘提取物对小鼠心肌组织中NO的影响
• 4.3.8 贯叶连翘提取物对小鼠血清中SOD的影响
• 4.3.9 贯叶连翘提取物对小鼠血清中MDA的影响
• 4.4 本章小结
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录