CDC25B小分子抑制剂的发现及评价

论文摘要

CDC25蛋白酪氨酸酯酶（cell division cycle 25,CDC25）属于高保守的双位点磷酸酯酶,它通过对CDK（cyclin-dependent kinase）复合物某些磷酸化位点去磷酸化来活化它,促使细胞过渡到下一个周期,从而参与了细胞周期调控,同时它是损伤修复通路中的重要组成部分,对于遗传信息的稳定起着重要作用。在许多癌症的组织中,CDC25是异常高表达的,而且有一些证据表明,这种高表达可能对于肿瘤的发展起着促进作用。而如果下调CDC25的表达的话,会引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖。所以CDC25现在已经被当作了一个潜在的药物作用靶点。我们从大肠杆菌系统中成功表达并纯化得到重组的CDC25B,并建了CDC25B高通量筛选模型,对国家新药筛选中心的48000个化合物进行了筛选,发现了两个新颖的CDC25B的抑制剂—LGH00031和LGH00045。其中LGH00031是不可逆的抑制剂,LGH00045是有较好选择性的、可逆的、混合型的抑制剂。在细胞水平对它们进行评价发现,它们能抑制细胞增殖,引起细胞的G2/M期阻滞,同时抑制了CDK1的15位酪氨酸的去磷酸化。对LGH00031的作用机制进行了研究,发现了LGH00031在体外是通过与DTT反应产生ROS带来的这种抑制作用,在细胞中LGH00031能够诱导产生ROS,ROS的清除剂—谷胱甘肽的前体NAC能够削弱LGH00031在细胞中的作用。推测LGH00031在细胞中带来的CDC25B的抑制是通过与细胞中的二氢硫辛酸反应产生ROS而引起的。这两个高活性的新型小分子CDC25B抑制剂的发现、相关抑制性质的研究以及在细胞水平的生物活性评价,为其进一步结构优化和药理学、药效学研究打下坚实的基础,这对于进一步理解选择性所依存的分子机制及寻找高效特异的PTPs抑制剂有着重要的意义,同时也为更加广泛地研究VHR的生理及病理功能提供了有力的工具。另外工作是有关烟酸保护胰岛β细胞的研究,发现烟酸能够保护链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠的β细胞,这个作用可能有烟酸的抗氧化应激作用有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 引言
• 1.2 PTP家族
• 1.3 CDC25蛋白酪氨酸酯酶
• 1.4 CDC25的抑制剂
• 1.5 高通量筛选
• 1.6 研究意义
• 第二章 CDC25B小分子抑制剂发现
• 第一节 CDC25B的表达纯化
• 2.1 材料和仪器
• 2.2 方法
• 2.3 结果及讨论
• 第二节 CDC25B的高通量筛选
• 2.4 仪器及材料
• 2.5 方法
• 2.6 结果
• 2.7 总结
• 第三章 新颖的CDC25B抑制剂LGH00031以及LHG00045性质及选择性研究
• 3.1 仪器及材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果及讨论
• 3.4 总结
• 第四章 细胞水平评价CDC25B抑制剂的生物活性
• 4.1 材料和仪器
• 4.2 方法
• 4.3 结果及讨论
• 4.4 总结
• 第五章 LGH00031抑制CDC25B的机制研究
• 5.1 材料和仪器
• 5.2 方法
• 5.3 结果及讨论
• 5.4 结论
• 2-5章工作总结
• 第六章 烟酸对链脲佐菌素致糖尿病大鼠及胰岛β细胞的作用
• 6.1 材料和仪器
• 6.2 方法
• 6.3 结果
• 6.4 总结
• 参考文献
• 在学期间研究成果
• 致谢
• 备注