NO、右归丸对小鼠排卵与卵母细胞质量的影响及NOS在卵巢中的表达研究

论文摘要

本试验以昆明白小鼠为研究对象,观察不同浓度NOS竞争性抑制剂L-NAME与NO供体SNP对小鼠排卵及卵母细胞成熟的影响,同时通过免疫组织化学的方法研究了eNOS、iNOS在小鼠卵巢中的表达差异及L-NAME对其表达的影响,以了解NO在卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的作用。同时研究了中药名方右归丸对超排过程中卵母细胞质量的影响。1.试验一采用单独给18-21天未性成熟的小鼠腹腔注射不同剂量的L-NAME、SNP或联合注射L-NAME及SNP的方法,研究体内抑制NOS以及外源性NO对小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响,以了解NO在卵母细胞成熟过程中的作用。结果表明:高剂量的L-NAME（50mg/kg、100mg/kg）对小鼠卵母细胞的第一极体排放有显著抑制作用（P＜0.01）,而SNP（1mg/kg、5mg/kg）处理组的小鼠排卵率则有显著的降低（P＜0.01）,两者联合注射（L-NAME 50mg/kg+SNP 5mg/kg）小鼠排卵率与对照组无显著差异,但第一极体排放率仍显著低于对照组。各组处理对卵母细胞的GVBD均没有影响。结论:合适的NO浓度在小鼠排卵和卵母细胞成熟过程中起着重要的作用,过高或过低的NO浓度都会对其排卵及卵母细胞的成熟造成影响。2.试验二以使用PMSG及hCG进行超数排卵处理的小鼠为试验材料,在hCG注射前后3h腹腔注射不同剂量的L-NAME。采用免疫组织化学的方法研究了在此过程iNOS、eNOS在小鼠卵巢中的表达差异,结果表明:iNOS、eNOS在小鼠卵巢中均有广泛的表达,但eNOS的表达与iNOS相比较强。其中iNOS在闭锁卵泡中表达量很少;hCG对iNOS在卵巢中的整体表达有明显的增强作用,5mg/kg L-NAME处理时其表达量明显减弱,而50mg/kg L-NAME处理时已经没有阳性表达。eNOS在未用激素处理时即有大量表达,而50mg/kg L-NAME处理时表达量明显减弱,100mg/kgL-NAME处理时只有少数原始卵泡及部分卵泡膜细胞尚有少量表达。3.试验三比较了右归丸、超排激素对小鼠排卵和卵母细胞质量的影响,并通过孤雌激活的方法比较了卵母细胞的发育质量,结果表明,右归丸能够与激素协同作用,显著提高卵母细胞的质量以及孤雌胚胎的早期发育能办（P＜0.05）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语表
• 文献综述部分
• 第一章 NO对哺乳动物雌性生殖过程的影响研究进展
• 1 NO及NOS
• 2 NO对卵巢功能的调节作用
• 2.1 NOS在卵巢中的表达
• 2.2 NO与卵母细胞发育
• 2.2.1 NO对卵母细胞成熟的影响
• 2.2.2 NO与排卵
• 2.2.3 NO在卵泡闭锁及细胞凋亡中的作用
• 2.3 NO与功能性黄体退化
• 3 NO对雌性动物生殖周期和生育能力的影响
• 4 NO对妊娠生理的调节
• 4.1 NO在胚胎附植中的作用
• 4.2 NO在妊娠维持中的作用
• 4.3 NO在分娩启动中的作用
• 5 NO的生物学检测方法
• 6 总结
• 参考文献
• 试验研究部分
• 第二章 体内抑制NOS以及外源性NO对小鼠排卵和卵母细胞成熟的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 药物和试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 操作液
• 1.5 动物分组及处理
• 1.6 卵母细胞的获得
• 1.7 卵母细胞成熟及畸形的判断标准
• 1.8 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同剂量的L-NAME对小鼠卵母细胞成熟及排卵的影响
• 2.2 不同剂量的SNP对小鼠卵母细胞成熟及排卵的影响
• 2.3 联合注射
• 3 讨论
• 3.1 L-NAME对小鼠排卵及卵母细胞成熟的影响
• 3.2 SNP对小鼠排卵及卵母细胞成熟的影响
• 3.3 联合注射SNT及L-NAME对小鼠排卵及卵母细胞成熟的影响
• 3.4 NO对卵母细胞形态的影响
• 参考文献
• 图版
• 图版说明
• 第三章 L-NAME对iNOS、eNOS在小鼠卵巢中表达影响的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 药物和试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 动物分组及处理
• 1.5 方法
• 1.5.1 载玻片的黏片剂处理
• 1.5.2 卵巢组织的免疫组织化学染色
• 2 结果
• 2.1 iNOS在小鼠卵巢中的表达情况
• 2.1.1 激素对iNOS表达的影响
• 2.1.2 L-NAME对iNOS表达的影响
• 2.2 eNOS在小鼠卵巢中的表达情况
• 3 讨论
• 3.1 激素对iNOS表达的影响
• 3.2 iNOS与闭锁卵泡的关系
• 3.3 eNOS-NO通路与iNOS-NO通路在排卵过程中的作用
• 参考文献
• 第四章 右归丸对小鼠卵母细胞质量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 药物和试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 动物分组及处理
• 1.5 卵母细胞的获得
• 1.6 卵母细胞的孤雌激活
• 1.7 激活鉴定
• 1.8 胚胎培养液中NO含量的测定
• 1.9 数据分析
• 2 结果
• 2.1 右归丸对小鼠排卵数及卵母细胞质量的影响
• 2.2 右归丸对小鼠卵母细胞孤雌激活率、孤雌激活胚胎早期发育能力的影响
• 2.3 右归丸对小鼠子宫增重的影响
• 2.4 右归丸对胚胎培养液中NO含量的影响
• 3 讨论
• 3.1 右归丸的促排卵作用
• 3.2 右归丸对卵母细胞质量的影响
• 3.3 右归丸对cAMP的影响
• 参考文献
• 图版
• 图版说明
• 全文结论
• 硕士期间发表论文
• 致谢