STAT3在地塞米松对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞功能变化中的作用

论文摘要

目的:炎症性肺病以肺内大量炎症细胞浸润,炎症介质释放,进而引起促炎/抗炎系统失衡为特征的肺脏疾病。长期以来糖皮质激素（glucocorticoids,GC）作为抗炎药用于炎症性肺病的治疗,但其个体疗效存在差异,其信号转导机制尚未明了。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）是主要炎症细胞之一,在炎症性肺病发生发展过程中起重要作用。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性杆菌产生的内毒素的主要活性成分,能够刺激机体免疫细胞产生炎症介质,促进炎症性肺病的发展。信号转导转录激活子-3（Signal transducers and activators of transcription-3,STAT3）的激活可以抑制炎症细胞因子的产生。本实验以小鼠AM为研究对象,观察地塞米松（dexamethasone, DEX）对LPS刺激的上述细胞分泌TNF-α、IL-10的影响,初步探讨STAT3在地塞米松对小鼠AM分泌TNF-α及IL-10影响中的作用,为临床应用糖皮质激素治疗炎症性肺病提供理论基础。方法:1. ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的浓度。培养MH-S细胞株,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS刺激2h、6h、12h;③DEX10-6mol/L +LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;④DEX10-8mol/L +LPS组:终浓度为1×10-8mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;⑤DEX10-6mol/L组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX刺激2h、6h、12h;⑥DEX10-8mol/L组:加入终浓度为1×10-8mol/L的DEX刺激2h、6h、12h。各组刺激成功后取细胞上清液,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的含量。2. ELISA试剂盒检测细胞细胞上清液中IL-10的浓度。方法及分组同TNF-α测定。3.免疫细胞化学法检测MH-S细胞中p-STAT3的表达。将MH-S细胞于培养板中进行爬片,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS分别刺激30min、2h、4h;③DEX+LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育2h后,用LPS分别刺激30min、2h、4h;④DEX组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX分别刺激30min、2h、4h。各组细胞刺激成功后,用免疫细胞化学法检测各组MH-S细胞中STAT3表达的变化。数据以均数±标准差（ ）表示,各组比较用单因素方差分析（One way ANOVA）,有显著性进一步用Student-Newman-Keuls（SNK-q）检验,P<0.05表示有统计学意义。结果:1.细胞上清液中TNF-α含量的变化: LPS刺激2h（164.29±0.44）pg/ml、6h（532.90±0.99）pg/ml、12h（350.78±10.29）pg/ml均明显高于对照组（30.81±3.81）pg/ml （P<0.05）。DEX10﹣6 mol/L +LPS2h（135.07±1.08）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS6h（397.65±0.49）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS12h（351.20±1.56）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS2h（162.05±0.35）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS6h（468.86±1.36）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS12h（304.92±0.26）pg/ml均明显高于对照组（P<0.05）;DEX10﹣6 mol/L +LPS6h组、DEX10﹣8mol/L+LPS6h组较LPS6h组明显降低（P<0.05）,且具有剂量依赖性;DEX10﹣6 mol/L +LPS2h组低于LPS2h组（P<0.05）,而DEX10﹣8 mol/L +LPS2h组较LPS2h组无明显变化（P>0.05）;DEX10﹣8 mol/L +LPS12h组低于LPS12h组（P<0.05）,而DEX10﹣6 mol/L +LPS12h组较LPS12h组无明显变化（P>0.05）。2.细胞上清液中IL-10含量的变化:对照组（23.21±0.35）pg/ml。LPS刺激2（h24.89±0.24）pg/ml较对照组无明显变化（P>0.05）, 6h（33.32±0.30）pg/ml、12h（44.93±0.99）pg/ml均高于对照组（P<0.05）,DEX预处理后,DEX10﹣6 mol/L +LPS2h（31.05±0.54）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS6h（60.00±0.33）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L +LPS12h（85.00±0.64）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS2h（27.74±0.46）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS6h（54.23±0.64）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L +LPS12h（78.05±0.30）pg/ml均高于对照组和LPS组（P<0.05）,其具有剂量依赖性。DEX10﹣6 mol/L2h（26.85±0.24）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L6h（50.64±0.08）pg/ml、DEX10﹣6 mol/L12h（76.22±0.95）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L6h（45.93±0.76）pg/ml、DEX10﹣8 mol/L12h（66.09±1.48）pg/ml均高于对照组和LPS组（P<0.05）,DEX10﹣8 mol/L2h（24.93±1.46）pg/ml较对照组和LPS2h组无明显变化（P>0.05）。3.免疫细胞化学结果表明:对照组几乎无黄染;LPS刺激30min时细胞开始出现黄染,其光密度值为（0.17±0.001）;LPS刺激2h时细胞黄染最强（0.22±0.007）;LPS刺激4h时细胞黄染开始减弱（0.20±0.005）;用DEX预处理后,LPS刺激引起的细胞黄染进一步增强,DEX+LPS30min组（0.25±0.004）,DEX+LPS2h组（0.34±0.011）, DEX+LPS4h组光密度值为（0.34±0.013）。经单因素方差分析,各组与对照组（0.12±0.013）比较p-STAT3表达均显著增高（P<0.05）;与LPS组比较,DEX+LPS组p-STAT3表达显著增高（P<0.05）。结论:1.LPS刺激MH-S细胞后,可引起细胞上清液中的TNF-α和IL-10分泌增加,用DEX干预后,可抑制TNF-α分泌,而促进IL-10分泌,并具有剂量依赖性。2. LPS刺激MH-S细胞后,可引起p-STAT3表达增加,而DEX能够使p-STAT3表达更加明显,这提示DEX可能通过p-STAT3的介导,进而抑制TNF-α而促进IL-10的分泌。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 STAT3 在地塞米松对 LPS 刺激小鼠肺泡巨噬细胞功能变化中的作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 参考文献
• 综述 糖皮质激素干预急性肺损伤时信号转导机制的研究进展
• 致谢
• 个人简历