维生素K3抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞增殖的实验研究

论文摘要

维生素K 是人体的必需维生素,通常作为一种凝血辅助因子参与凝血过程。维生素K3（Vitamin K3,VK3）是维生素K1 的衍生物,是人工合成的维生素。近年来很多研究提示维生素K 有抗肿瘤作用,尽管有研究证明维生素K1、K2、K3 均有抗肿瘤活性,但是目前的研究焦点集中在维生素K3 上。本文在体外研究VK3 对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3M细胞的增殖抑制作用,并探讨其可能的发生机制。结果显示,VK3 对PC-3M有增殖抑制作用,且呈时间、剂量依赖性。小剂量VK3 主要通过凋亡抑制细胞增殖,大剂量主要通过坏死抑制细胞增殖。小剂量VK3 可以通过增加细胞内活性氧的产生同时消耗细胞内清除活性氧的酶类诱导细胞发生氧化应激,通过激活NF-κB,使NF-κB 进入胞核调节相关基因的转录,诱导细胞发生凋亡。加入NAC 后可以拮抗VK3 的致氧化应激的作用,并能有效减少NF-κB 的活化。从另一方面佐证VK3 是通过氧化应激诱导细胞凋亡从而抑制PC-3M 细胞增殖。本研究为进一步探讨VK3 对激素非依赖性前列腺癌的抑制机制,并为VK3 能够应用于临床治疗激素非依赖性前列腺癌奠定了理论基础。

论文目录

• 绪论
• 一、材料与方法
• 1 材料
• 1.1 主要仪器与设备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要试剂的配制
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 MTT 实验检测 VK3 对 PC-3M 细胞的增殖抑制
• 2.3 VK3 对 PC-3M 细胞形态的影响
• 2.4 丫啶橙（AO）染色检测凋亡细胞
• 2.5 流式细胞术（Flow cytometry）检测细胞周期及凋亡峰
• 2.6 NAC 抗氧化作用
• 2.7 DCFH-DA 荧光分光光度法检测细胞内 ROS 水平
• 2.8 RT-PCR 检测 GSH-Px 和 CAT mRNA 的表达
• 2.9 NF-κB 的免疫细胞化学染色
• 2.10 NF-κB 的蛋白分析 Western Blot
• 二、结果
• 1、MTT 比色法检测 VK3 对 PC-3M 细胞的增殖抑制
• 2、VK3 对 PC-3M 细胞的形态变化的影响
• 3、丫啶橙（AO）染色检测调亡细胞
• 4、VK3 对 PC-3M 细胞周期和凋亡峰的影响
• 5、NAC 抗氧化作用的观察
• 6、细胞内 ROS 水平的检测
• 7、GSH-Px mRNA 和 CAT mRNA 的表达
• 8、NF-κB 的免疫细胞化学染色结果
• 9、胞浆内的 NF-κB 蛋白检测
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英文缩写词表
• 中英文摘要
• 致谢
• 导师及作者简介