论文摘要
目的探讨代谢记忆效应对原代人脐静脉内皮细胞功能损伤的作用方法原代人脐静脉内皮细胞分为4组:1正常对照组,使用含5.5mM D-glucose M199培养基培养7天。2持续高糖组,使用含30mM D-glucose M199培养基培养7天。3短暂高糖组,使用含30mM D-glucose M199培养基培养1天后改为5.5mM D-glucose M199培养基培养7天。4渗透压对照组:使用含5.5mM D-glucose,24.5mM D-mannitol M199培养基培养7天。检测内皮细胞功能相关指标:使用MTT法评估内皮细胞增殖能力,使用流式细胞术检测内皮细胞凋亡水平,使用DCFH-DA作为荧光探针流式细胞术测定细胞内活性氧族（ROS）水平,使用黄嘌呤氧化法评估SOD水平,使用硫代巴比妥酸法评估MDA水平,使用酸还原酶法评估内皮细胞上清液中NO水平,使用Real-time PCR技术测定eNOS mRNA表达水平,使用western blot技术测定eNos蛋白水平。结果高糖组及短暂高糖组人原代脐静脉内皮细胞增殖受到抑制,甘露醇对照组亦受到抑制,高糖使细胞凋亡增加,ROS,MDA水平升高,SOD水平下降,恢复正糖培养后,仍然不能恢复,而甘露醇对照组与正常对照组相比无差异,高糖组及短暂高糖组eNOS及一氧化氮水平呈先升高后下降趋势,培养7天后,低于正常对照组,而高渗对照组与正常对照组相比无差异。结论短暂高血糖抑制内皮细胞增殖,增加内皮细胞凋亡,诱发血管内皮细胞氧化应激,损伤血管内皮舒张功能,即使是恢复正常血糖后,以上效应仍部分持续,提示高血糖“代谢记忆”效应参与血管内皮细胞持续损伤及血管并发症形成。
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