淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7细胞作用机制研究

论文摘要

目的:研究不同浓度的淫羊藿素（Icaritin,ICT）单独应用和与雌激素联合应用,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和抑制作用,并分析该过程中雌激素受体ERα的表达情况,初步探讨ICT的雌激素作用和抗雌激素作用发生的可能途径,为可能寻找一个与手术配合来治疗乳腺癌的方法提供理论依据。方法: 1.体外培养依赖雌激素的乳腺癌细胞MCF-7细胞,用不同浓度的ICT（ 10-10 , 10-9, 10-8 , 10-7, 10-6 , 5×10-6,10-5 ）,不同浓度的E2（10-13,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6）以及10-9的E2+不同浓度的ICT（10-7,10-6,5×10-6,10-5,5×10-5）分别作用于MCF-7细胞6天后,倒置显微镜下观察MCF-7细胞的形态学变化。2.用不同浓度的ICT（10-10,10-9, 10-8,10-7, 10-6,5×10-6,10-5,5×10-5）,不同浓度的E2（10-13,10-12,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6）以及10-9的E2+不同浓度的ICT（10-8,10-7, 10-6,5×10-6,10-5,5×10-5）分别作用于MCF-7细胞4天,5天,6天后,应用MTT法检测细胞增殖抑制的变化,并计算增殖率和抑制率。3.10-9的E2+不同浓度的ICT（10-7, 10-6,5×10-6,10-5,）作用MCF-7细胞6天后,Hoechst33342染色观察凋亡细胞,并计算凋亡率。4.淫羊藿素与雌二醇联合应用时,用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测ERα报告基因表达活性。5.RT-PCR检测淫羊藿素和雌激素联合应用MCF-7细胞后,雌激素受体ERα表达的变化。结果: 1.雌激素单独处理MCF-7细胞后,细胞分裂相变多,部分细胞变为多边形,随着雌激素E2浓度的增加,细胞数量越来越多,当E2浓度达到10-9时,细胞无论从数量还是分裂相上都达到最大。之后细胞数量和分裂相又逐渐变少。2.淫羊藿素单独处理MCF-7细胞后,细胞分裂相变多,部分细胞变为多边形,随着雌激素ICT浓度的增加,细胞数量越来越多,当ICT达到10-5时,细胞分裂相达到最大,之后细胞数量和分裂相又逐渐变少。3.10-9E2+不同浓度的ICT（10-7, 10-6,5×10-6,10-5,）作用MCF-7细胞后,细胞分裂相变少,部分细胞变圆,当浓度为10-5时,细胞漂浮和坏死现象最为明显。4.MTT比色法测定结果显示在淫羊藿素浓度10-6-5×10-5mol/l浓度范围内可以不同范围的促进MCF-7细胞增殖,当淫羊藿素浓度为10-5mol/l,促增殖活性最为明显。与雌激素E2相比,淫羊藿素具有较弱的雌激素活性。5.淫羊藿素与雌二醇联合应用于MCF-7细胞,MTT比色法测定结果显示,当浓度为10-9mol/l的E2与浓度大于10-9mol/l的ICT联合应用于MCF-7细胞时,MCF-7细胞增值率明显低于相同浓度的E2单独作用时。6.ICT单独应用时能诱导ERα报告基因的表达,当ICT与E2合用时,ICT对E2激活的ERα报告基因又抑制作用。7.淫羊藿素与雌二醇联合应用于MCF-7细胞时,RT-PCR检测结果显示能抑制ERα的表达。结论:1.淫羊藿素在一定浓度范围内可以促进MCF-7细胞增殖,具有一定的雌激素样作用。2.淫羊藿素与雌二醇联合作用时,可以拮抗前者的雌激素作用,抑制后者的促MCF-7细胞增殖作用。3.淫羊藿素的雌激素样作用,可能是通过雌激素受体ERα发生的,其具有一定的选择性雌激素受体调节剂（SERMs）作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英汉缩略词对照表
• 前言
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料与仪器
• 1.2 实验方法
• 2 结果
• 2.1 淫羊藿素与雌激素联合作用后细胞生长状态的观察
• 2.2 淫羊藿素对 MCF-7 细胞增殖的影响
• 2.3 淫羊藿素与雌二醇联合作用对 MCF-7 细胞增殖的影响
• 2.4 E2 与 ICT 联合应用诱导细胞凋亡
• 2.5 ICT+E2 联合作用对 ERα报告基因表达活性影响
• 2.6 淫羊藿素与雌激素联合作用后,RT-PCR 检测 ERα的表达
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 致谢