西兰花种子发芽过程中萝卜硫素的形成变化及结构鉴定

论文摘要

本文建立了薄层层析-紫外分光光度法（TLC-UV）和HPLC法对西兰花种子及芽苗中萝卜硫素含量的检测方法,并对两种检测方法进行了比较,研究了西兰花种子发芽过程中的萝卜硫素、硫代葡萄糖苷含量和芽苗生理生化的变化及其相关性,并对西兰花芽苗中的水解产物进行了分离纯化和结构鉴定。研究结果如下：1、萝卜硫素的TLC-UV检测方法为：正己烷：乙醇=5：5,展层2.5 h,萝卜硫素Rf值为0.48,斑点刮层后甲醇超声洗脱10min,10000rpm离心,紫外分光光度计254 nm处定量检测,在提取液中萝卜硫素浓度大于1.0 mg/g时,该检测方法具有较好的精密性和重复性；HPLC检测方法为：有机溶剂多次萃取后,选择10%的乙腈作为萝卜硫素的最终溶剂进样分析,采用反相C18-XDB色谱柱分离,色谱条件为,乙腈水梯度（10%-60%-100%,0-25-30 min）洗脱,流速0.6 ml/min,检测波长254 nm,萝卜硫素出峰时间在15.5 min；两种方法检测结果比较表明：采用薄层层析法分析西兰花种子中萝卜硫素,其分离效果与稳定性尚待提高；而HPLC具有较好的分离效果和较高的稳定性。2、西兰花种子发芽过程中,芽长、根长及鲜重随发芽时间延长而增加,芽苗干重变化在2.5-3.0 mg之间,其呼吸强度在发芽24-36 h内迅速增加并保持较高水平。4-甲基亚磺酰基丁基硫代葡萄糖苷的含量在发芽初期（0-12 h）呈上升趋势,然后下降48 h时降至最低（2.97 mg/g）,而在60 h时又上升至6.11 mg/g,并维持在较高水平。萝卜硫素在种子发芽最初的24 h内急剧下降,然后缓慢回升,在第48 h达到最高值(2.99 mg/g,随后又下降到较低水平。西兰花种子发芽过程中萝卜硫素含量变化与根长和芽长的增长、干重、鲜重变化无相关性,但与4-甲基亚磺酰基丁基硫代葡萄糖苷含量成极显著负相关。3、西兰花芽苗中水解产物的分离与结构鉴定。用制备HPLC对西兰花种子发芽产物进行分离纯化,采用MS、NMR技术对分离得到的2种产物进行结构鉴定,分别是4-羟基-3,5-二甲氧基肉桂酸和萝卜硫素。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 萝卜硫素生理功能
• 1.1 提高机体代谢致癌物能力
• 1.2 提高机体抗氧能力
• 1.3 诱导癌细胞凋亡
• 1.4 其他功能
• 2 萝卜硫素的生理代谢过程
• 2.1 硫代葡萄糖苷的生理代谢途径
• 2.1.1 氨基酸侧链R基的延伸
• 2.1.2 硫代葡萄糖昔前体的合成
• 2.1.3 硫代葡萄糖苷的侧链修饰
• 2.1.4 硫代葡萄糖苷的多样性
• 2.2 萝卜硫素的形成
• 2.2.1 硫代葡萄糖苷的水解
• 2.2.2 影响硫代葡萄糖苷水解的因素
• 3 影响萝卜硫素产量的因素
• 3.1 硫代葡萄糖苷含量及其组成
• 3.1.1 遗传因素
• 3.1.2 生长环境
• 3.1.3 组织分布
• 3.1.4 营养调控
• 3.1.5 生长阶段
• 3.1.6 采后处理
• 3.2 黑芥子酶活性
• 3.2.1 黑芥子酶来源
• 3.2.2 黑芥子酶作用条件
• 3.2.3 调节蛋白
• 4 萝卜硫素制备方法
• 4.1 植物提取法
• 4.1.1 原料的选择
• 4.1.2 提取剂选择
• 4.2 化学合成法
• 5 萝卜硫素的分离与纯化
• 5.1 有机溶剂萃取法
• 5.2 层析法
• 6 萝卜硫素的分析测定方法
• 6.1 硫代葡萄糖苷的分析方法
• 6.2 萝卜硫素的分析
• 6.3 黑芥子酶的分析
• 7 其他异硫氰酸酯的研究进展
• 7.1 烯丙基异硫氰酸酯
• 7.2 其他
• 8 本研究目的意义和主要内容
• 8.1 研究的目的意义
• 8.2 主要研究内容
• 参考文献
• 第二章 萝卜硫素检测方法研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 西兰花种子发芽方法
• 1.4.2 萝卜硫素的提取
• 1.4.3 TLC-UV法
• 1.4.4 高效液相色谱法
• 1.4.5 检测方法比较
• 1.5 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 TLC-UV法检测结果分析
• 2.1.1 薄层层析分离
• 2.1.2 检测波长的确定
• 2.1.3 标准曲线的制作
• 2.1.4 超声洗脱时间的确定
• 2.1.5 精密性检验
• 2.1.6 重复性检验
• 2.2 HPLC检测结果分析
• 2.2.1 反相SB-C18色谱柱分析
• 2.2.2 反相XDB-C18色谱柱分析
• 2.2.3 标准曲线的制作
• 2.2.4 精密性检验
• 2.2.5 重复性检验
• 2.3 两种检测方法比较
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第三章 西兰花种子发芽过程中生理生化与萝卜硫素含量变化
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 西兰花种子发芽方法
• 1.4.2 常规生理生化指标的检测
• 1.4.3 萝卜硫素含量的检测
• 1.4.4 4-甲基亚磺酰基丁基硫代葡萄糖苷含量的检测
• 1.5 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 西兰花种子主要化学成分
• 2.2 芽长、根长及呼吸强度的变化
• 2.3 干物质及粗脂肪含量的变化
• 2.4 发芽对萝卜硫素含量的影响
• 2.5 发芽对硫代葡萄糖苷变化的影响
• 2.6 发芽过程中生理生化和硫苷含量与萝卜硫素含量的相关性分析
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第四章 西兰花芽苗中发芽产物分离纯化与结构鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 西兰花种子发芽方法
• 1.4.2 硫苷水解物的提取
• 1.4.3 分析型HPLC方法
• 1.4.4 制备型HPLC方法
• 1.4.5 浓缩、干燥过程
• 1.4.6 质谱方法
• 1.4.7 核磁共振波谱方法
• 1.5 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 硫苷酶解产物的分离
• 2.2 组分4的分析
• 2.3 组分5的分析
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢