论文摘要
第一部分CD52在中枢神经系统HBs中的表达目的研究CD52在中枢神经系统血管母细胞瘤中的表达分布。方法收集2006年1月至2007年12月在华山医院神经外科手术中取得的20例中枢神经系统血管母细胞瘤（HBs）标本,其中3例做超微切片进行电镜观察;20例做石蜡切片,并与另外20例病理证实的HBs石蜡切片共同进行HE染色和CD52免疫组织化学单标与双标染色;20例提取肿瘤蛋白组织液,并运用蛋白质印迹（westernblot）方法检测CD52在HBs肿瘤蛋白提取液中的表达情况。结果HBs肿瘤可呈囊性或实质性两种形态,由丰富的毛细血管网及基质细胞两种结构组成,血管由单层扁平的内皮细胞围成,血管周围可见周细胞。与正常脑组织相比,CD52免疫组化染色在HBs肿瘤中呈高表达（P＜0.05）,囊性组与实质性组间无明显差异（P＞0.05）,颅内其它肿瘤（脑膜瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、血管外皮瘤）中CD52呈阴性。HBs中三种细胞成分对波形蛋白（Vimentin）染色阳性,基质细胞对CD52染色阳性,内皮细胞对CD34染色阳性,周细胞对平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色阳性。与正常脑组织相比,HBs肿瘤组织蛋白提取液中的CD52呈高表达（P＜0.01）,并明显高于颅内其它肿瘤。结论CD52在中枢神经系统血管母细胞瘤基质细胞中高表达,为进一步深入研究中枢神经系统HBs的诊治提供了新的思路。第二部分中枢神经系统HBs体外培养及CD52抗原的表达目的研究中枢神经系统血管母细胞瘤的体外培养方法以及CD52的表达分布情况。方法收集2006年1月至2007年12月在华山医院神经外科手术中取得的10例中枢神经系统血管母细胞瘤（HB）新鲜标本,采用贴壁筛选法分离培养HB基质细胞,进行原代及传代培养,倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞的形态及生长特性。运用免疫荧光双标的方法检测CD52在HB肿瘤细胞中的分布情况。运用蛋白质印迹（westernblot）方法验证培养细胞及培液中CD52的表达情况。结果HB肿瘤细胞可在体外DMEM培液中培养存活,并且生长状况良好,具有活跃的增殖能力。体外培养中的HB细胞中,基质细胞是主要成分（大于80%）,且生长时间较长。免疫荧光显示CD52在培养细胞上大量表达,CD34与α-SMA在培养细胞中表达极微。共聚焦显微镜下显示CD52呈颗粒状,主要表达在细胞膜及邻近细胞膜的细胞浆内,并且在细胞外亦可见到。另外,蛋白质印迹显示,在培养细胞与培液中均发现有CD52的可溶形式表达。结论基质细胞为HB真正的肿瘤细胞。在体外培养的中枢神经系统血管母细胞瘤基质细胞中有CD52高表达,且基质细胞有可能通过分泌或脱落过程将CD52排出至细胞外,为进一步研究中枢神经系统HB新的诊断方法提供了帮助。第三部分可溶性CD52在中枢神经系统HBs患者体液中的表达目的研究可溶性CD52在中枢神经系统血管母细胞瘤患者体液中的表达。方法研究2006年1月至2007年12月在华山医院神经外科收治的20例中枢神经系统血管母细胞瘤（HBs）患者,收集其中20例手术前血液、尿液标本,手术中的脑脊液,肿瘤手术后1天、1周及1月的血液、尿液标本以及7例术中肿瘤囊液。运用蛋白质印迹方法（western-blot）检测可溶性CD52（sCD52）在HBs患者体液中的表达及术前术后变化情况。并用sCD52检测VHL患者的亲属来预测VHL的发病。结果sCD52在所有20例HBs患者的手术前的血液和尿液中以及术中脑脊液和7例肿瘤囊液中较正常人的血清及尿液呈高表达。13例散发型HBs肿瘤手术全切除患者手术后1天的血液尿液中sCD52无明显下降,术后1周始可呈明显下降,术后1月与术后1周相似。2例散发型HBs肿瘤非全切除患者及5例VHL病患者术后sCD52水平较术前无明显下降。检测在1例有家属史的VHL患者的6位亲属的尿液中sCD52水平,发现其中有三人出现尿sCD52表达阳性。对6人行全面的体格检查及辅助检查（头颈MR,腹部B超及眼底检查）,发现尿sCD52阳性亲属中有一人被检出患有肾癌及颅内多发HBs,一人为HBs患者,已行三次手术。另一人检查阴性。而另三位尿sCD52阴性亲属检查均为阴性。结论在中枢神经系统HBs患者体液内存在可被检出的sCD52,并有可能作为HBs的肿瘤标记物,并成为HBs患者的术前筛查及术后随访指标。
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