CD147-shRNA载体构建及其对肝癌细胞SMMC-7721及HepG2生物学行为的影响

论文摘要

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一,恶性度极高,预后差。肝癌的治疗方法多样,但总体疗效有限。CD147是一种高度糖基化的单次跨膜糖蛋白,在肝癌等多种恶性肿瘤中表达水平明显升高,可诱导基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases , MMPs）的分泌从而促进肿瘤细胞浸润和转移,与肿瘤的恶性程度相关。RNA干扰（RNA interference , RNAi）是指由内源性或外源性短双链RNA诱导的同源mRNA的降解过程,可使基因的表达沉默。通过构建针对目标基因的siRNA或shRNA,导入细胞内使目标基因沉默,从而达到抑制肿瘤生长的目的,是目前肿瘤学和基因学的研究热点之一。本试验成功构建了pBS/U6/CD147-shRNA表达质粒,采用脂质体法转染至人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2,通过Westernblot法和免疫荧光法检测了重组质粒对肝癌细胞CD147表达的抑制作用,并筛选出抑制效果最佳的质粒,进一步探讨对肝癌细胞生长速度、细胞增殖和细胞运动能力的影响及MMP-9和AFP表达水平的变化。通过建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型,在体内探讨了pBS/U6/CD147-shRNA3对肝癌细胞SMMC-7721的体内成瘤的影响;证实肝癌细胞SMMC-7721转染CD147-shRNA后移植瘤生长明显减缓,免疫组化证实体内移植瘤组织CD147表达明显减弱。本试验验证了通过抑制CD147的表达可以抑制肝癌细胞的肿瘤特性,为选择CD147作为肝癌治疗靶点提供了理论依据。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 第一节 RNAi 研究进展
• 1 RNAi 发现简史
• 2 RNAi 作用机制
• 3 RNAi 基本技术
• 4 RNAi 的特点
• 5 RNAi 的应用
• 6 问题与展望
• 第二节 CD147 研究进展及其与恶性肿瘤的关系
• 1 CD147 的结构
• 2 CD147 的分布与功能
• 3 CD147 的作用机制
• 4 CD147 与恶性肿瘤
• 5 问题和展望
• 第三节 原发性肝细胞癌的基因治疗进展
• 1 治疗基因的选择
• 2 基因转移技术和基因载体系统
• 3 肝癌基因治疗的导入途径
• 4 问题与展望
• 第二章 实验研究
• 第一节 CD147-shRNA重组质粒的构建及鉴定及其对肝癌细胞系CD147内源性表达的抑制作用研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第二节 CD147-shRNA重组质粒对肝癌细胞增殖和运动性及MMP-9和AFP表达的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第三节 CD147-shRNA重组质粒对裸鼠肝癌皮下移植瘤的影响
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表论文和参加的科研项目
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢