CTLA-4Ig对小鼠流产模型外周Th17/Treg细胞及妊娠结局的影响

论文摘要

目的：探讨妊娠早期应用细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA-4Ig）对小鼠流产模型外周Th17/Treg细胞及妊娠结局的影响。方法：建立经典小鼠模型:自然流产模型CBA/J♀×DBA/2♂（研究组），正常妊娠模型CBA/J♀×BALB/c/2♂（对照组）。合笼后见阴栓为妊娠第0天，孕第4天将自然流产模型小鼠随机分为两组,一组腹腔注射CTLA-4Ig10ug/天（0.5mg/Kg），另一组及对照组腹腔注射等量的生理盐水（NS），隔天一次，连续3次，孕第14天处死各组孕鼠。①计算各组孕鼠胚胎吸收率，探讨CTLA-4Ig对小鼠流产模型妊娠结局的影响。②提取各组小鼠淋巴细胞。③流式细胞仪检测分析孕鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+、CD4+IL-17A+细胞比例变化，来探讨CTLA-4Ig在小鼠流产模型Th17/Treg细胞转换中的作用。④荧光定量PCR检测孕鼠脾脏Foxp3mRNA和RORγtmRNA的变化，探讨CTLA-4Ig是否可以调节Treg细胞特异性转录因子Foxp3和Th17细胞特异性转录因子RORγt在小鼠流产模型外周的表达。结果：①流产组胚胎吸收率为25%，显著高于正常妊娠组（P<0.05）。经CTLA-4Ig处理的流产模型孕鼠胚胎吸收率（9.9%）明显下降，与自然产模型孕鼠比较，差异显著（P<0.05）；且与正妊娠孕鼠胚胎吸收率（10.8%）相似，差异无统计学意义（P>0.05）。②流式分析结果显示：流产组脾淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例（2.19±0.91%）显著低于正常妊娠组，而CD4+IL-17A+/CD4+细胞比例（3.37±0.93%）显著高于正常妊娠组（P <0.05）。经CTLA-4Ig处理的流产模型孕鼠脾淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+/CD4+细胞比例（3.60±0.79%）明显高于自然流产模型孕鼠，而CD4+IL-17A+/CD4+细胞比例（1.51±0.42%）低于自然流产模型孕鼠,差异显著（P<0.05）；与正常妊娠孕鼠比较，两者差异无统计学意义（P>0.05）。③荧光定量PCR扩增Foxp3mRNA和RORγtmRNA的变化：与正常组比较，流产组Foxp3mRNA的表达明显降低，RORγtmRNA的表达明显升高（P<0.05）。经CTLA-4Ig处理的流产模型孕鼠Foxp3mRNA的表达显著高于流产孕鼠（P <0.05）；RORγtmRNA的表达低于流产孕鼠（P <0.05）。与正常孕鼠比较，经CTLA-4Ig处理的流产模型孕鼠Foxp3mRNA及RORγtmRNA的表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：正常妊娠免疫耐受需要母胎界面维持一定的免疫平衡，在这种平衡状态下胚胎不被排斥，能持续妊娠直至分娩。我们的结果表明CTLA-4Ig可以上调Treg细胞、下调Th17细胞，在体内诱导流产小鼠模型外周Th17/Treg细胞之间的平衡，形成有利于妊娠的环境，降低胚胎吸收率，最终改善妊娠结局。

论文目录

• 英文缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 1.前言
• 2.实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2.主要仪器设备
• 2.3 主要试剂
• 3.实验方法与步骤
• 3.1 试剂配制
• 3.2 试验方法
• 3.3.统计学处理
• 4.结果
• 5.讨论
• 6.结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 综述
• 参考文献