文昌鱼肝盲囊—卵黄蛋白原的组织定位及Cd和Cu的毒性作用

论文摘要

文昌鱼（Amphioxus）是现存的与脊椎动物原始祖先最接近的原索动物,是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,是研究脊椎动物进化和发育同源性分析的珍贵材料。本文从卵黄蛋白原的合成以及重金属对文昌鱼的毒性两方面,将文昌鱼肝盲囊与脊椎动物肝脏的功能进行比较,以证明二者之间的等同性。卵黄蛋白原（Vitellogenin, Vg）是卵生动物卵黄蛋白的前体,卵生脊椎动物在肝脏中合成Vg,经血液循环运输到卵巢后,被正在发育的卵母细胞吸收,降解为卵黄蛋白,储存在卵子中,为发育胚胎提供营养物质。本文用免疫学方法对卵黄蛋白原在文昌鱼体内的定位进行了研究。免疫印迹结果表明,小鼠抗文昌鱼卵黄蛋白原血清能够与文昌鱼肝盲囊、卵巢抽提液以及体液产生杂交反应。而且在三种样品中卵黄蛋白原的分子一致,都是320 kDa左右,这与前期报道的文昌鱼卵黄蛋白原的分子量一致,说明文昌鱼卵黄蛋白原在从合成部位运输到卵巢过程中并未降解（Sun和Zhang,2001）。免疫组化结果显示,卵黄蛋白原定位于昌鱼肝盲囊、肠下静脉以及卵巢中。这说明文昌鱼肝盲囊和脊椎动物肝脏类似,能够合成卵黄蛋白原;所合成Vg经过血液循环运送到需要部位。这表明至少在卵黄蛋白原合成方面,文昌鱼肝盲囊和脊椎动物肝脏具有同源性。这与文昌鱼肝盲囊是脊椎动物肝脏前体这一观点相一致。镉和铜是水体环境中主要污染物。镉对文昌鱼急性毒性实验结果表明,其96h半致死浓度为3.716 （3.038-4.544） mg/L,安全浓度为0.372 mg/L。亚致死剂量实验选用0.743 mg/L （20% 96h LC50）的和1.115 mg/L （30% 96h LC50）两种浓度处理文昌鱼。组织病理学观察结果表明,文昌鱼鳃和肝盲囊是镉毒害的靶器官,结构损害严重,具体表现为肝盲囊壁细胞空泡化,细胞间隙加大。文昌鱼鳃细胞受损严重,细胞空泡化进而解体。随镉离子处理浓度加大,鳃和肝盲囊结构破坏更加严重。脊椎动物中丙氨酸转氨酶（ALT; EC 2.6.1.2）和门冬氨酸转移酶（AST; EC 2.6.1.1）的活性变化是反应肝损伤的一个有效的指标。Vaglio和Landriscina1

论文目录

• 第一章 文献综述
• 1 文昌鱼——脊椎动物始祖的现存代表
• 2 卵黄蛋白原的研究进展
• 3 水体中重金属铜和镉毒性研究进展
• 4 玫瑰无须鲃研究背景
• 5 问题的提出
• 第二章 卵黄蛋白原在文昌鱼中的免疫组化定位
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 青岛文昌鱼的采集
• 2.2 抗文昌鱼卵黄蛋白原抗体的制备
• 2.3 天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和免疫印迹
• 2.4 卵黄蛋白原的免疫组化定位
• 3 结果
• 3.1 免疫印迹结果
• 3.2 免疫组化定位结果
• 4 讨论
• 第三章 重金属镉对文昌鱼毒性分析
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试剂和实验动物
• 2.2 急性毒性实验
• 2+暴露对文昌鱼组织病理学影响'>2.3 亚致死剂量Cd²⁺暴露对文昌鱼组织病理学影响
• 2+暴露对丙氨酸转氨酶（ALT）和门冬氨酸转移酶（AST）酶活影响'>2.4 Cd²⁺暴露对丙氨酸转氨酶（ALT）和门冬氨酸转移酶（AST）酶活影响
• 3 结果
• 2+对文昌鱼的半致死浓度'>3.1 Cd²⁺对文昌鱼的半致死浓度
• 2+暴露破坏文昌鱼肝盲囊和鳃'>3.2 Cd²⁺暴露破坏文昌鱼肝盲囊和鳃
• 2+暴露对文昌鱼ALT、AST酶活影响'>3.3 Cd²⁺暴露对文昌鱼ALT、AST酶活影响
• 4 讨论
• 第四章 铜暴露对文昌鱼和玫瑰无须鲃毒性比较分析
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试剂和实验动物
• 2.2 急性毒性实验
• 2.3 亚致死剂量铜暴露对文昌鱼及玫瑰无须鲃组织病理学影响
• 3 实验结果
• 3.1 急性毒性实验结果
• 2+文昌鱼和玫瑰无须鲃组织病理学影响'>3.2 Cu²⁺文昌鱼和玫瑰无须鲃组织病理学影响
• 2+对文昌鱼组织病理学影响'>3.2.1 Cu²⁺对文昌鱼组织病理学影响
• 2+对玫瑰无须鲃鳃、肝脏及肾的组织病理学影响'>3.2.2 Cu²⁺对玫瑰无须鲃鳃、肝脏及肾的组织病理学影响
• 4. 讨论
• 总结
• 参考文献
• 发表论文
• 作者简介
• 致谢