论文摘要
目的与背景慢性脑缺血是血管性痴呆(vascular dementia,VD)和阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发病的重要基础。近来研究证明,AD和VD均存在明显的血管因素,而脑血流低灌注在痴呆的发病进程中的作用日益引起重视,因此研究其发病机制对慢性脑缺血相关性疾病的临床防治具有普遍意义。慢性脑缺血所致的神经损伤主要表现为学习和记忆等认知功能损害。海马缺血性损伤是其主要的病理基础。慢性脑缺血导致海马功能改变包含两个主要方面的作用:神经细胞的损伤和延迟性胆碱能功能的缺损。中枢胆碱能神经有促进学习记忆、激活脑电、维持觉醒、参与精神意志活动等重要生理功能。胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,Chat)常作为研究胆碱能神经元的特殊标志。丁基苯酞(dl-n-butylphthalide,NBP)是治疗脑缺血的一种新药。有研究表明NBP可改善小鼠全脑缺血脑能量代谢,增加局部脑缺血大鼠缺血区的脑血流,改善大脑中动脉结扎(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠学习记忆障碍。本文通过免疫组化、反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcriptase Polymerse Chain Rection,RT-PCR)、斑点免疫结合实验三种方法观察大鼠海马区Chat的变化,旨在探讨NBP对慢性缺血引起的认知功能障碍的影响及其作用机制。材料方法1.实验动物与分组健康Wistar大鼠150只,随机分为5组,每组30只,A组:对照组(假手术+溶剂);B组:单纯缺血组(手术+溶剂);C组:缺血低剂量治疗组(手术+低剂量NBP+溶剂);D组:缺血高剂量治疗组(手术+高剂量NBP+溶剂);E组:预防组(中等剂量NBP+溶剂+手术)。2.模型的制作钝性分离单纯缺血组和缺血高、低剂量治疗组大鼠双侧颈总动脉,用0号手术线分别结扎其近心端及远心端;分离对照组双侧颈总动脉但不结扎。3.标本的制作手术3月后,所有大鼠经心脏灌注后,断头取脑,部分用4%的多聚甲醛固定后做石蜡切片,供做免疫组化用;部分放入超低温冰箱,以备RT-PCR及免疫斑点表达。4.实验室检测方法应用免疫组化、反转录聚合酶链式反应、斑点免疫结合实验等技术。5.统计学方法应用SPSS 13.0统计软件(SPSS Inc)进行统计学分析。符合正态分布且方差齐,不同组之间的计量资料的比较应用单因素方差分析,否则用非参数检验。检验水准α=0.05。结果1.实验动物一般情况。术后大鼠均出现精神萎靡,反应迟钝,进食减少。术后1天,A组精神恢复;B、C、D、E组改善不明显。3-5天B、C、D、E组逐渐恢复,1周后反应、进食正常。2.Chat免疫组化染色各组海马区Chat阳性神经元数目进行观察并统计:B组与A组相比,Chat的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);C组、D组、E组与B组相比Chat的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);D组与C组、E组相比Chat表达增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。E组与C组差异不具有统计学意义(P>0.05)。3.ChatmRNART-PCR的结果各组海马区ChatmRNA光密度值与ActinmRNA光密度值的比值进行观察并统计:B组与A组相比,Chat的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);C组、D组、E组与B组相比Chat的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);D组与C组、E组相比Chat表达增加,且差异具有统计学意义(P<0.05);E组与C组差异无统计学意义(P>0.05)。4.Chat斑点免疫结合实验的结果各组海马区Chat免疫斑点的灰度值进行观察并统计:B组与A组相比,Chat的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);C组、D组、E组与B组相比Chat的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);D组与C组、E组相比Chat表达增加,且差异具有统计学意义(P<0.05)。E组与C组差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.永久性结扎大鼠双侧颈总动脉建立慢性脑缺血模型,接近人类慢性脑缺血的发生过程,手术操作简单,重复性好。2.慢性脑缺血3月后,大鼠海马区胆碱能神经功能明显受损。3.NBP可抑制慢性脑缺血引起的海马区Chat阳性神经元数目减少,提高ChatmRNA的转录水平,增加Chat蛋白的表达,并且NBP还可预防慢性脑缺血后Chat的下降。
论文目录
相关论文文献
- [1].脑梗死后室管膜下区ChAT~+神经元促进梗死周围区血管新生[J]. 实用医学杂志 2017(06)
- [2].教师专业发展生态取向下的集体备课——基于CHAT活动理论的分析[J]. 新课程研究(上旬刊) 2016(05)
- [3].针刺对干眼模型兔胆碱能神经元ChAT表达的影响[J]. 辽宁中医杂志 2017(02)
- [4].ChAT表达激活剂的筛选及其机制研究[J]. 中国实验诊断学 2014(10)
- [5].六味地黄丸对老年大鼠学习记忆及基底前脑ChAT阳性神经元的影响[J]. 江西中医学院学报 2012(05)
- [6].Effects of Flavonoids from Stem and Leaf of Scutellaria baicalensis Georgi on Memory Impairment and Expression of ChAT and NOS in Chronic Cerebral Ischemia Rats[J]. Medicinal Plant 2013(04)
- [7].尼古丁对胆碱乙酰转移酶在人牙周膜成纤维细胞中表达的影响[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2010(04)
- [8].G-CSF对东莨菪碱痴呆模型大鼠认知及ChAT表达的影响[J]. 实用医药杂志 2015(07)
- [9].海马胆碱能神经元刺激肽促进海马胆碱能神经元再生的研究[J]. 中国康复医学杂志 2015(09)
- [10].出生前后胆碱乙酰转移酶在大鼠脑内定位的研究[J]. 神经解剖学杂志 2008(02)
- [11].寿聪胶囊对老年性痴呆大鼠学习记忆及皮层ChAT影响的研究[J]. 时珍国医国药 2011(01)
- [12].免疫荧光电镜技术观察ChAT在脊髓前角运动神经元中超微结构水平上的分布[J]. 分析仪器 2011(05)
- [13].大鼠脑损伤后ChAT、NCAM表达及其与认知障碍变化的关系[J]. 福建医科大学学报 2010(05)
- [14].聊天(chat)技术在图书馆实时参考咨询服务中的应用——以腾讯QQ为例[J]. 科技信息 2009(26)
- [15].复方脑益康对AD大鼠脑组织ChAT表达的影响[J]. 中国中药杂志 2008(09)
- [16].活血化痰方对慢性脑缺血大鼠认知功能及脑ChAT、NCAM的影响[J]. 中西医结合心脑血管病杂志 2018(13)
- [17].神经生长因子缓释微球移植对AD模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的保护作用[J]. 解剖学研究 2008(01)
- [18].“益气调血、扶本培元”药线灸对多发脑梗死性痴呆大鼠海马ChAT、AChE活性的影响[J]. 亚太传统医药 2019(01)
- [19].宁夏无果枸杞芽提取物对自然衰老小鼠学习记忆、MAO、GSH-Px及ChAT活性的影响[J]. 宁夏医科大学学报 2014(08)
- [20].束缚-浸水应激对大鼠迷走背核胆碱能神经元活动的影响[J]. 山东大学学报(医学版) 2011(03)
- [21].针康法对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马CHAT表达的影响[J]. 中医药信息 2009(03)
- [22].耳针对阿尔茨海默病大鼠记忆能力及ChAT和GFAP表达的影响[J]. 中国针灸 2009(10)
- [23].Analysis on Interrelation between Electroacupuncture-lnduced Cumulative Analgesic Effect and Hypothalamic Cholinergic Activities in Chronic Neuropathic Pain Rats[J]. Chinese Journal of Integrative Medicine 2012(09)
- [24].灵芝三萜类化合物对砷中毒大鼠海马组织形态学及脑组织中AChE和ChAT含量的影响[J]. 贵州医科大学学报 2020(07)
- [25].醒脑益智剂对2型糖尿病认知功能障碍小鼠性激素及ChAT、ApoE mRNA表达的影响[J]. 中华中医药杂志 2018(04)
- [26].针药结合对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区ChAT、AChE表达的影响[J]. 皖南医学院学报 2018(04)
- [27].寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学习记忆及海马区ChAT的影响[J]. 中国老年学杂志 2010(02)
- [28].Aβ1-42单克隆抗体对阿尔茨海默病大鼠认知能力及脑组织Aβ和ChAT表达的影响[J]. 郑州大学学报(医学版) 2011(01)
- [29].Effects of protein deprivation and re-feeding on P2X_2 receptors in enteric neurons[J]. World Journal of Gastroenterology 2010(29)
- [30].重组人神经生长因子治疗阿尔茨海默病的机理研究[J]. 中国血液流变学杂志 2008(01)