论文摘要
本研究为甲肝核酸疫苗的基础性研究工作。应用重叠延伸PCR 技术,获得了HAV 表位抗原与HBV 核心抗原（HBcAg）的融合基因,命名为CVPX。实验进行过程中,设立HBc 基因（C 基因）平行对照组。将CVPX定向克隆于pET-28a（+） 原核表达载体, 构建原核表达质粒pET-28a（+）-CVPX,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆,转化至BL21（DE3）宿主菌中,利用IPTG 诱导目的基因在大肠杆菌中表达,表达产物以包涵体形式存在。表达产物能与抗-HAV 抗体发生特异性的抗原-抗体反应。同时将CVPX定向克隆于pVAX1 真核表达载体,成功构建真核表达质粒pVAX1-CVPX,利用脂质体转染CHO 细胞,mRNA 水平上检测到目的基因进行了有效转录,蛋白质水平上检测到表达的蛋白具有HAV 抗原的反应原性。
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