异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制研究

论文题目: 异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 中西医结合基础

作者: 孙文燕

导师: 孙建宁

关键词: 异亚丙基莽草酸,脑缺血再灌注,炎症,粘附分子,细胞因子,环氧合酶,转录因子

文献来源: 北京中医药大学

发表年度: 2005

论文摘要: 缺血性脑血管病是我国死亡原因前 6 位重大疾病中的第一杀手,深入探讨其发病机制有重要的意义。近年研究表明炎症机制在脑缺血/再灌注损伤发生发展过程中起重要作用,抗炎治疗已经成为缺血性脑血管病的干预手段之一。脑缺血后炎症的组织学特征是白细胞浸润,而细胞因子、粘附分子、炎症介质和转录因子在此病理过程中起关键作用。细胞因子、粘附分子、转录因子和白细胞浸润之间显示明显的链锁关系,此即所谓的炎症级联反应。异亚丙基莽草酸(3,4-oxo-isopropylidene shikimic acid,ISA)是从中药八角属植物八角茴香中提取的有效成分莽草酸(shikimic acid,SA)的合成衍生物,研究表明 ISA能够明显抑制多种诱导剂所致的血小板聚集以及实验性血栓的形成,抑制血管内皮细胞的活化,对局灶性脑缺血具有良好的保护作用。本文采用酶联免疫分析、放射免疫测定、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应等手段,从血脑屏障的破坏、脑水肿的产生、白细胞的浸润、细胞因子粘附分子表达、环氧合酶激活以及转录因子活化等炎症环节探讨了ISA 对大鼠暂时性大脑中动脉阻塞(tMCAO)模型炎症反应的干预作用及可能的作用机理。 1 异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠神经元的保护作用目的:研究 ISA 对脑缺血再灌注大鼠神经症状、脑梗死范围、血清 NSE 含量和脑病理形态学改变的影响。方法:参照 Koizumi 与 Nagasawa 方法制作 tMCAO 大鼠模型,按照 Zea Longa 5 级评分法于术后 3 h、6 h 和 24 h 进行神经病学症状评分,术后 24 h 以放射免疫法测定血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量,以 TTC 染色法测定脑梗死范围,以 HE 染色进行病理形态学观察。结果:tMCAO 大鼠出现了明显的神经缺损症状和大面积脑梗死,血清 NSE 含量显著升高,神经元大量变性坏死或脱失,间质水肿,白细胞浸润。ISA 200 mg/kg、ISA 100 mg/kg 可明显降低模型大鼠的神经病学症状分值和血清 NSE 含量,减小脑梗死范围,减轻脑组织病理性损害。结论:ISA 能够减轻神经元的缺血性损伤。 2 异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠炎症反应的干预作用目的:探讨 ISA 对 tMCAO 大鼠血脑屏障、脑水肿以及白细胞浸润的影响。方法:以伊文思蓝、IgG 通透性实验测定脑微血管的通透性变化,以基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)免疫组化测定反映脑微血管的破坏情况,以干湿重法测定脑组织含水量的变化,以脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性测定反映白细胞浸润情况。结果:tMCAO 大鼠脑微血管对伊文思蓝和 IgG 表现出明显的通透性,MMP-9 大量表达;脑组织含水量明显增加,MPO 活性显著增强。ISA 200 mg/kg、ISA 100 mg/kg 能显著降低 tMCAO 大鼠脑微血管的通透性,伊文思蓝含量和 IgG 表达明显降低;ISA 200 mg/kg 能够显著降低2 异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制研究脑微血管 MMP-9 的阳性表达面积以及积分光密度;ISA 200 mg/kg、ISA 100 mg/kg 能显著降低 tMCAO 大鼠脑含水量和 MPO 活性,改善脑水肿并减少白细胞的浸润。结论I:SA能够显著减轻脑缺血再灌注所引发的炎症反应。3 异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠粘附分子表达的影响目的:观察 tMCAO 大鼠脑组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、巨噬细胞抗原复合体-1(Mac-1)表达的变化以及 ISA 的影响。方法:脑缺血 3 h 再灌注 21 h,tMCAO 大鼠以多聚甲醛心脏灌注取脑,石蜡包埋切片,进行ICAM-1、LFA-1 及 Mac-1 的免疫组织化学染色,显微镜下观察及图像分析。结果:脑缺血再灌注后 ICAM-1 在脑微血管内皮细胞大量表达,LFA-1 及 Mac-1 在浸润于脑组织的白细胞大量表达。ISA 200 mg/kg 可显著降低模型大鼠 ICAM-1 阳性表达的血管数、阳性面积以及积分光密度,显著降低 LFA-1 的阳性面积、积分光密度及 Mac-1 的积分光密度。结论:ISA 能够显著下调脑缺血再灌注后粘附分子的表达。4 异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠炎性细胞因子表达的影响目的:研究 ISA 对 tMCAO 大鼠脑组织中白介素 1β(IL-1β)、白介素 8(IL-8)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)的含量以及 IL-8 mRNA 表达的影响。方法:脑缺血 3 h 再灌注21 h,制作脑组织匀浆,取上清液以 ELISA 法测定其中 IL-1β、IL-8、TNF-α 的含量;取缺血区脑组织以 RT-PCR 法研究 IL-8 mRNA 的表达情况。结果:tMCAO 大鼠脑组织IL-1β、IL-8、TNF-α 含量以及 IL-8 mRNA 表达明显升高,ISA 200 mg/kg、100 mg/kg 可明显减少模型大鼠脑组织 IL-1β、IL-8、TNF-α 的水平,ISA 200 mg/kg 可显著降低 IL-8mRNA 的表达。结论:ISA 可显著降低脑缺血再灌注后炎性细胞因子的高表达。5 异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠环氧合酶表达的影响目的:研究 ISA 对 tMCAO 大鼠血浆前列腺素 E2(PGE2)的含量以及脑组织环氧合酶-2(COX-2)蛋白和 mRNA 表达的影响。方法:脑缺血 3 h 再灌注 21 h,大鼠颈总动脉取血,分离血浆,以放射免疫法测定 PGE2 的含量;脑组织石蜡切片,以免疫组织化学方法观察 COX-2 蛋白表达;取缺血区脑组织以 RT-PCR 法研究 COX-2 mRNA 的表达。结果:三者在假手术组呈低水平表达,tMCAO 大鼠血浆 PGE2含量显著升高,脑组织 COX-2 蛋白以

论文目录:

中文摘要

英文摘要

缩略词表

综述一脑缺血再灌注损伤的炎症机制

1 血脑屏障破坏及脑水肿发生的炎症机制

2 免疫细胞的变化及细胞因子粘附分子的表达

3 脑缺血再灌注炎症损伤与花生四烯酸代谢

4 脑缺血再灌注炎症损伤与核转录因子

5 脑组织损伤的特异标志物

参考文献

综述二八角属中药药理毒理及临床应用

1 八角属中药药理作用

2 八角属中药毒理研究

3 八角属中药临床应用

参考文献

前言

第一部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠神经元的保护作用

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠炎症反应的干预作用

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠粘附分子表达的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第四部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠炎性细胞因子表达的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第五部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠环氧合酶表达的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第六部分异亚丙基莽草酸对脑缺血再灌注大鼠转录因子表达的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

结语

致谢

个人简历

附图

发布时间: 2005-07-11

异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制研究

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