论文摘要
目的随着血液净化技术的不断发展，维持血液透析患者的生存率较以往有了显著提高。然而，心血管疾病（Cardiovasculardisease,CVD）仍是维持透析患者（Maintenance hemodialysispatients，MHD）主要并发症和主要死亡原因。有研究表明，高通量血液透析滤过（High-flux hemodiafiltration, HDF）有助于改善透析患者的脂质代谢紊乱，减轻炎症反应，降低维持透析患者心血管疾病发生率和死亡率。然而，HDF减轻脂代谢紊乱降低患者心血管事件发生的机制尚未完全清楚。ATP结合盒受体A1（ATP-binding cassettetransporter A1,ABCA1）、ATP结合盒受体G1（ATP-binding cassettetransporter G1, ABCG1）是胆固醇逆转运中最重要的受体，在脂代谢紊乱及动脉硬化发生和发展中起着重要作用。因此，本课题以人外周血单核巨噬细胞为研究对象，观察不同血液净化方式对尿毒症患者外周血单核巨噬泡沫细胞形态以及巨噬细胞ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白的表达情况的影响；观察不同血液净化方式尿毒症患者外周血Treg/Th17比例变化及与ABCA1、ABCG1表达的关系。以探讨不同血液透析方式对尿毒症患者动脉粥样硬化的影响及其可能的作用机制，为尿毒症患者动脉粥样硬化的临床预防和治疗寻找更合理治疗的方法。方法选取重庆医科大学附属第一医院长期规律透析的慢性肾衰患者60例，按不同血液净化方式分为2组：血液透析（hemodialysis,HD）组、血液透析滤过（HDF）组，每组30例，同时选取健康体检者20例。均于透析前抽取空腹静脉血，密度梯度离心分离尿毒症患者外周血单个核细胞，巨噬细胞集落刺激因子诱导贴壁巨噬化，油红O染色、CD68免疫荧光鉴定巨噬细胞，酶法测定巨噬细胞内总胆固醇（TotalCholesterol, TC）、胆固醇酯（Cholesterol Ester, CE）和游离胆固醇（FreeCholesterol, FC）的水平；应用RT-PCR与Western blot方法测定巨噬细胞ABCA1、ABCG1mRNA及其蛋白表达。密度梯度离心法获得外周血单个核细胞，流式细胞技术检测不同血液净化方式患者外周血Treg、Th17细胞及Treg/Th17比例表达情况，ELISA法测定患者血清IL-6、TNF-α、IL-10水平，探讨Treg/Th17比例失衡对巨噬细胞ABCA1、ABCG1的影响，阐明两者的关系。结果1.HD、HDF组巨噬细胞内总胆固醇、胆固醇脂均较对照组增加（P <0.01）；与对照组比较，HD、HDF组巨噬细胞游离胆固醇明显增加（P <0.05）；HDF组较HD组巨噬细胞内总胆固醇、胆固醇脂、游离胆固醇减少（P <0.05）。2.与对照组比较，HD、HDF组巨噬细胞ABCA1mRNA、ABCG1mRNA的表达均显著降低（P<0.01，P <0.01），HDF组较HD组患者的ABCA1mRNA、ABCG1mRNA表达明显升高（P<0.01, P<0.05）。3.与对照组比较，HD组、HDF组巨噬细胞ABCA1、ABCG1蛋白表达均明显下降（P<0.01；P <0.05），HDF组与HD组比较ABCA1、ABCG1蛋白表达均升高（P<0.05）。4. HD、HDF组患者外周血中Treg细胞的比例明显低于对照组（P<0.05），HDF组明显高于HD组（P<0.05）。HD、HDF组患者外周血中Thl7细胞的比例明显高于对照组（P<0.05），HDF组明显低于HD组（P<0.05）。HD、HDF组患者Treg／Thl7的比值明显低于对照组（P <0.05），HDF组比HD组明显升高（P <0.05）。5.与对照组比较，HD、HDF组外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达显著降低（P <0.01，P<0.01）；与HD组比较，HDF组患者的Foxp3mRNA表达明显升高（P<0.05）。与对照组比较，HD、HDF组ROR-γtmRNA的表达显著升高（P <0.01，P<0.01），与HD组比较，HDF组ROR-γt mRNA表达升高（P <0.05）。6.与对照组比较，HD、HDF组患者血清IL-6、TNF-α水平均增高（P<0.05），而IL-10水平减低（P <0.05）；HDF组患者血清IL-6、TNF-α水平均低于HD组（P<0.05）；HDF组患者血清IL-10水平高于HD组（P <0.05）。7.尿毒症血液透析患者Treg细胞比例与ABCA1、ABCG1mRNA呈正相关（r=0.793，P<0.05；r=0.698，P <0.05）；而Th17细胞比例ABCA1、ABCG1mRNA呈负相关（r=-0.711，P <0.05；r=-0.387，P <0.05）；尿毒症血液透析患者Treg细胞比例与ABCA1、ABCG1蛋白呈正相关（r=0.791，P <0.05；r=0.761，P <0.05）；而Th17细胞比例ABCA1、ABCG1蛋白呈负相关（r=-0.577，P <0.05；r=-0.685，P <0.05）。结论血液透析患者存在巨噬细胞内胆固醇流出受体ABCA1、ABCG1功能障碍，高通量透析滤过治疗能够改善ABCA1、ABCG1的功能障碍；ABCA1、ABCG1的功能障碍与外周血Treg/Th17细胞比例失衡有关。HDF较HD能够部分纠正透析患者Treg/Th17细胞比例失衡，导致促炎性细胞因子的释放减少，抑炎性细胞因子的释放增加，增加巨噬细胞ABCA1、ABCG1的表达，进而减少动脉粥样硬化及心血管并发症的发生。
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