论文摘要
目的:分离纯化骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）及内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells,EPCs）,探讨骨髓间充质干细胞联合内皮祖细胞移植对心肌缺血大鼠疗效的影响。方法:1、成熟雄性SD大鼠（n=50）先选取5只作为骨髓干细胞来源的供体;将40只大鼠通过结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血模型,造模成功后将存活的大鼠（共30只）按照随机数字表法分为手术对照组（6只）、骨髓间充质干细胞移植组（8只）、内皮祖细胞移植组（8只）及骨髓间充质干细胞联合内皮祖细胞移植组（8只）;另外5只作为假手术组（只开胸置线而不结扎）。2、从5只大鼠四肢骨骼内分离骨髓间充质干细胞（MSCs）及内皮祖细胞（EPCs）进行体外培养。取第3代细胞进行移植。3、造模成功后约7～10天,将各组大鼠按照计划分别移植入MSCs和/或EPCs;手术对照组及假手术组注射等量空白培养基。细胞移植4周后,测量五组大鼠的血流动力学指标,做心脏切片观察心肌组织、梗死面积及毛细血管密度情况。结果:1、40只大鼠在造模过程中有10只死亡;移植前后各组均有大鼠死亡;最后检测结果时手术对照组3只,MSCs组6只,EPCs组4只,联合移植组6只,假手术组5只。2、用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离干细胞,并用DMEM和M199培养液诱导分化。3、移植4周后检测存活大鼠的血流动力学检查指标显示,联合移植组与手术对照组、MSCs组及EPCs组相比,左室收缩压LVS【P（127.3±9.5 vs 94.0±7.2 vs 112.7±10.1 vs 109.4±6.3）mmHg】、左室内压最大上升速率+dp/dt【（897.7±45.6 vs 440.5±61.8 vs 663.2±80.7 vs 540.4±58.5）mmHg/s】及左室内压最大下降速率-dp/dt【（610.6±59.7 vs 346.2±68.1 vs 547.0±60.7 vs 460.5±39.8）mmHg/s】明显升高（P<0.05）;左室舒张末压LVDP【（6.3±0.6 vs 15.7±4.4 vs 9.7±1.8 vs 10.8±2.1）mmHg】则明显降低（P<0.01）,MSCs组与EPCs组上述指标比较无显著性差异（P>0.05）。病理检查显示:假手术组未见梗死灶;心肌梗死面积以联合组最小（28.3±3.2）%,明显少于手术对照组（45.5±2.4）%（P≈0.001）;亦小于MSCs组（34.0±6.1）%及EPCs组（36.5±3.3）%（P均<0.03）;同时MSCs组及EPCs组都小于手术组（P均<0.05）,但此两组间无明显区别（P=0.10）。毛细血管密度测定以联合组（6.3±1.6）个/200倍视野为最高,EPCs组（3.6±0.9）高于MSCs组（2.1±0.3）,而MSCs也高于手术对照组（1.1±0.3）,组间差异明显,P均<0.01。结论:1、分离、纯化骨髓干细胞,用特定的培养液在体外可将干细胞诱导分化为MSCs和EPCs,并实现大量扩增。2、MSCs和EPCs主要是通过改善心脏血流动力学指标、缩小梗死面积、促进毛细血管新生等来改善心功能。3、MSCs与EPCs联合移植可用于治疗缺血性心脏病,其综合疗效优于此两种细胞的单独应用。
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