黄粉虫抗菌物质的提取、活性测定及应用研究

论文摘要

为了给黄粉虫抗菌物质的开发利用提供新的实验依据和理论基础,本论文测定了黄粉虫幼虫和成虫产生的抗菌物质对常见的病原细菌和真菌的抑制作用效果,初步研究了其抑菌作用机制,同时研究了这些抗菌物质对果品的防腐应用。获得的主要结果如下：1黄粉虫抗菌物质的提取通过10种不同溶剂：甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、苯等对黄粉虫幼虫匀浆物进行浸泡提取,用提取物对大肠杆菌进行抗菌试验,筛选出打孔加样抑菌圈法作为最佳测定方法,乙酸乙酯为最佳提取溶剂。用4种不同的诱导方法诱导黄粉虫幼虫产生抗菌物质,最终确定最佳诱导方法为菌液注射法（诱导后饲养48h）。对黄粉虫幼虫和成虫体内的抗菌物质进行诱导,用乙酸乙酯提取,利用硅胶柱层析法对粗提物进行分离。2黄粉虫抗菌物质的抗细菌、真菌活性利用打孔加样抑菌圈法检测幼虫和成虫抗菌物质对4种细菌的抗菌活性,利用生长速率法测定抗菌物质对5种病原真菌的抗菌活性。结果表明：两类虫体的抗菌物质对所测4种细菌（包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌）均有显著的抑菌效果：其中黄粉虫幼虫和成虫抗菌物质对大肠杆菌的抑制效果均强于氨苄青霉素（100mg/mL）,且诱导后幼虫抗菌物质对大肠杆菌的抑制效果略强于成虫,抑菌圈直径约为27.40mm（含加样孔直径）。抗菌物质对大肠杆菌均有较好的抑菌作用,且热稳定性较好。MIC检测结果表明幼虫和成虫抗菌物质经0.05%吐温-20溶液稀释后对大肠杆菌的MIC最低为6.25mg/mL,对金黄色葡萄球菌的MIC最低为12.5mg/mL;且幼虫和成虫抗菌物质的0.05%吐温-20稀释液在最小抑菌浓度时对这两种菌有抑菌作用。通过对黄粉虫抗菌物质对大肠杆菌致死曲线的测定,结果表明抗菌物质对大肠杆菌不是抑菌作用,而是杀菌作用。黄粉虫幼虫和成虫抗菌物质对5种受试的果蔬病原真菌均有显著的抑菌效果：200mg/mL抗菌物质对番茄枯萎病菌的体外抑制效果最好（幼虫抗菌物质菌丝生长抑制率为62.34%,成虫为60.61%）,对苹果炭疽病菌的体外抑制效果最差（幼虫抗菌物质菌丝生长抑制率为29.55%,成虫为27.27%）；并且抗菌物质对番茄枯萎病菌是致死效应,在接触6d和12d后转移,7d后含200mg/mL的黄粉虫抗菌物质的平板上仍未见番茄枯萎病菌有生长现象。3黄粉虫抗菌物质的防腐应用用不同浓度的黄粉虫抗菌物质,通过损伤接种的方式对4种果蔬病原真菌进行体内抑制作用实验,结果表明：抗菌物质对苹果炭疽病害、梨黑星病害、枣炭疽病害和番茄枯萎病害有明显的抑制作用,在三种不同浓度下均能降低果蔬的腐烂率,幼虫和成虫抗菌物质浓度为200mg/mL时,番茄腐烂率（与无菌水相比）分别下降了34.97%、31.31%,效果最明显。与体外抑制作用效果相比,体内抑制作用的效果虽然有所降低,但直接证明了黄粉虫抗菌物质对果蔬病害有抑制作用。黄粉虫抗菌物质的防腐应用试验结果表明：抗菌物质对番茄的整果保鲜效果较明显,保鲜时间最长可达30d；抗菌物质和热水浸果结合使用,对番茄整果保鲜效果更好,保鲜时间最大可延长8d；200mg/mL抗菌物质对豆腐干有较强的防腐作用,其保质期约为10～15d。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 黄粉虫抗菌物质的提取
• 2.2 黄粉虫抗菌物质的抗细菌活性测定
• 2.3 黄粉虫抗菌物质的抗真菌活性测定
• 2.4 黄粉虫抗菌物质的防腐应用
• 2.5 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 黄粉虫抗菌物质的提取
• 3.1.1 抗菌物质最佳提取溶剂、抗细菌活性的最佳测定方法
• 3.1.2 抗菌物质的最佳诱导方法
• 3.1.3 抗菌物质的提取
• 3.2 黄粉虫抗菌物质的抗细菌活性
• 3.2.1 抗细菌谱与热稳定性
• 3.2.2 最小抑菌浓度
• 3.2.3 定量抑菌试验
• 3.2.4 抗菌物质对大肠杆菌的致死曲线
• 3.3 黄粉虫抗菌物质的抗真菌活性
• 3.3.1 抗菌物质对病原真菌的体外抑制作用
• 3.3.2 抗菌物质抑真菌机制
• 3.4 黄粉虫抗菌物质的防腐应用
• 3.4.1 抗菌物质对果蔬病原真菌的体内抑制作用
• 3.4.2 抗菌物质对番茄自然腐烂的抑制效果的影响
• 3.4.3 热水浸果对抗菌物质对番茄自然腐烂的抑制效果的影响
• 3.4.4 抗菌物质对豆腐干保存效果的影响
• 4 讨论
• 4.1 不同提取剂对提取物抗菌效果的影响
• 4.2 抗菌物质的广谱抗菌性
• 4.3 抗菌物质的成分分析
• 4.4 抗菌物质的作用方式与作用机理
• 5 结论
• 5.1 黄粉虫抗菌物质的提取
• 5.2 黄粉虫抗菌物质的抗细菌、真菌活性
• 5.3 黄粉虫抗菌物质的防腐应用
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文