论文摘要
本研究选取笋用竹中的红哺鸡竹和白哺鸡竹为研究材料,分别选择对成年红哺鸡竹和白哺鸡竹的节芽、地下茎和嫩枝条的嫩茎段三种外植体进行组织培养。对基本培养基、激素组合、培养条件以及防褐变措施进行了研究,确立了笋用竹节芽萌芽、愈伤组织形成和增殖培养的最适培养基,找到了减轻褐变的有效方法。主要研究结果如下:(1)外植体的消毒处理:采集3月初地下茎和5月健康的嫩枝条,洗涤剂溶液浸泡15~30min左右,半胱氨酸浸泡30min,流动的清水冲洗30~60min。然后在超净工作台上用75%酒精和0.1%的生汞分别消毒30~45s和6~9min,消毒效果最好,诱导率高,污染率低,可有效控制污染的发生(2)培养基:MS培养基适合笋用竹的节芽诱导和愈伤组织的诱导,以及继代培养。均附加蔗糖25g/L,琼脂7g/L,pH值5.8。(3)以节芽诱导萌芽:以笋用竹红哺鸡竹和白哺鸡竹的饱满的节芽作为外植体,红哺鸡竹节芽诱导的最佳培养基为MS+TDZ0.1mg/L+BA5mg/L,白哺鸡竹节芽诱导的最佳培养基为MS+TDZ0.01mg/L+BA5 mg/L(4)选取笋用竹红哺鸡竹和白哺鸡竹的地下茎和嫩枝条的嫩茎段为外植体诱导愈伤组织:红哺鸡竹地下茎的最佳培养基是MS+2,4-D2.0mg/L+KT1.0 mg/L,红哺鸡竹嫩枝条嫩茎段的最佳培养基是MS+2,4-D3.0mg/L+KT1.0mg/L。白哺鸡竹地下茎的最佳培养基是MS+2,4-D3.0mg/L+KT1.0mg/L,白哺鸡竹嫩枝条嫩茎段的最佳培养基是MS+2,4-D2.0mg/L+KT1.0 mg/L(5)不定芽的增殖:以初代培养获得的红哺鸡竹和白哺鸡竹无菌芽诱导丛生芽,BA和NAA影响笋用竹增殖的主要因子。红哺鸡竹和白哺鸡竹继代培养的最佳培养MS+NAA1mg/L+BA5mg/L(6)愈伤组织的增殖:在愈伤组织增殖试验过程中,愈伤组织生长比较的慢,并且褐变现象越来越严重,大多数的愈伤组织在继代第二次之后,逐渐发黑直至死亡。只有极少数的存活,但增殖率非常的低,也没有出现分化的现象。(7)防褐变措施:外植体在半胱氨酸溶液(100 mg/L)中浸泡30min,培养基中添加一定量的聚乙烯吡哆烷酮和10mg/L AgNO3,以及在20℃的温度下进行暗培养,能有效抑制外植体的褐变。
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