皱皮柑果皮中总黄酮的提取、纯化及初步鉴定

论文摘要

本文以皱皮柑为原料,研究了皱皮柑皮中总黄酮的最佳提取工艺条件和纯化方法,并通过显色反应、高效液相色谱法（HPLC）对皱皮柑中的总黄酮进行了初步鉴定。主要研究结果如下:1.利用硝酸铝体系与黄酮化合物形成络合物的原理,以芦丁为对照品,采用分光光度法测定皱皮柑皮中总黄酮的含量,该方法简单快速,为探索最佳提取和纯化工艺的指标控制提供了快速有效的评价方法。采用该方法测定了不同时期皱皮柑果皮中总黄酮含量,发现9月青果皮中的总黄酮含量最高,随着时间的延后,总黄酮含量呈下降趋势,综合各方面因素考虑,选择10月的果实作为提取原料较为适宜。2.采用回流提取和超声辅助提取两种方法对总黄酮的提取条件进行了系统研究,通过单因素和正交试验确定了各自的最佳工艺条件,即回流的最佳工艺条件为:20目的橘皮粉末与40%的乙醇以料液比1:30混合,在70℃水浴中回流提取60min后可达到最佳提取效果,总黄酮平均得率为1.54%;超声辅助提取的最佳工艺条件为:20目的橘皮粉末与50%的乙醇以料液比1:50混合,在50℃的条件下超声处理20min,总黄酮平均得率为1.52%。3.在获得皱皮柑总黄酮粗提物后,对其纯化方法进行了探索,结果表明:以60-100目的聚酰胺树脂作为吸附材料,上样流速为2mL/min,上样后静态吸附30min后,以3BV的蒸馏水淋洗柱子,然后用2BV 40%的乙醇溶液以1mL/min的速度进行洗脱,即可达到理想的纯化橘皮总黄酮的效果。4.在对纯化后的样品进行显色反应的基础上,采用HPLC法对总黄酮成分进行检测,发现在皱皮柑的黄酮类物质当中,主要成分为新橙皮苷,占皱皮柑总黄酮含量的85%,其次为柚皮苷,占总黄酮的12.3%,此外还有少量的橙皮苷。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 柑橘属中黄酮类物质的研究进展
• 1.1 柑橘属中黄酮化合物的种类
• 1.2 柑橘属中黄酮化合物的生理活性
• 1.2.1 抗氧化及清除自由基作用
• 1.2.2 防治心血管疾病
• 1.2.3 防癌、抗癌作用
• 1.2.4 抗炎、抗菌、抗病毒及抗过敏作用
• 1.2.5 降血糖作用
• 1.3 柑橘属中黄酮化合物的提取方法
• 1.3.1 水提法
• 1.3.2 有机溶剂萃取法
• 1.3.3 碱提取酸沉法
• 1.3.4 微波提取法
• 1.3.5 超声波提取法
• 1.3.6 超临界CO2流体萃取法
• 1.4 柑橘属中黄酮化合物的分离纯化方法
• 1.4.1 柱层析法
• 1.4.2 超滤法
• 1.4.3 大孔树脂吸附法
• 1.4.4 膜分离技术
• 1.4.5 高速逆流色谱技术（HSCCC）
• 1.5 柑橘属中黄酮化合物的分析方法
• 1.5.1 化学检识法
• 1.5.2 分光光度法
• 1.5.3 高效液相色谱法（HPLC）
• 2 本研究的目的和主要内容
• 2.1 研究的目的及意义
• 2.2 研究的主要内容
• 第二章 皱皮柑果皮中总黄酮含量的测定
• 1 试验材料、仪器与试剂
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器和试剂
• 2 试验方法
• 2.1 芦丁对照品溶液的制备
• 2.2 最大吸收波长的选择
• 2.3 芦丁标准工作曲线的绘制
• 2.4 重现性试验
• 2.5 加样回收率试验
• 2.6 显色稳定性试验
• 2.7 样品溶液的制备及总黄酮含量的计算
• 3 结果与分析
• 3.1 最大吸收波长的选择
• 3.2 芦丁标准工作曲线
• 3.3 重现性试验
• 3.4 加样回收率试验
• 3.5 显色稳定性试验
• 3.6 不同时期皱皮柑果皮中总黄酮的含量测定
• 4 小结与讨论
• 第三章 皱皮柑果皮中总黄酮的提取研究
• 1 回流提取皱皮柑果皮中总黄酮的工艺研究
• 1.1 试验材料、仪器和试剂
• 1.1.1 原料的预处理
• 1.1.2 仪器和试剂
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 提取溶剂的选择
• 1.2.2 乙醇浓度对黄酮得率的影响
• 1.2.3 不同水浴温度对黄酮得率的影响
• 1.2.4 不同物料比对黄酮得率的影响
• 1.2.5 不同粒径对黄酮得率的影响
• 1.2.6 不同提取时间对黄酮得率的影响
• 1.2.7 正交试验设计
• 1.2.8 正交试验数据处理
• 1.3 结果与讨论
• 1.3.1 不同溶剂对提取效果的影响
• 1.3.2 乙醇浓度对提取效果的影响
• 1.3.3 不同水浴温度对提取效果的影响
• 1.3.4 不同物料比对提取效果的影响
• 1.3.5 不同粒径对提取效果的影响
• 1.3.6 回流时间对提取效果的影响
• 1.3.7 正交试验结果与分析
• 1.3.8 最佳工艺条件的稳定性试验结果
• 2 超声辅助提取皱皮柑果皮中总黄酮的工艺研究
• 2.1 试验材料、仪器和试剂
• 2.1.1 原料的预处理
• 2.1.2 仪器和试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 超声时间对提取效果的影响
• 2.2.2 料液比对提取效果的影响
• 2.2.3 乙醇浓度对提取效果的影响
• 2.2.4 粒径对提取效果的影响
• 2.2.5 温度对提取效果的影响
• 2.2.6 正交试验设计
• 2.2.7 正交试验数据处理
• 2.2.8 最佳工艺条件的稳定性验证试验
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 超声时间对提取效果的影响
• 2.3.2 料液比对提取效果的影响
• 2.3.3 乙醇浓度对提取效果的影响
• 2.3.4 粒径对提取效果的影响
• 2.3.5 温度对提取效果的影响
• 2.3.6 正交试验结果与分析
• 2.3.7 最佳工艺条件的稳定性试验结果
• 3 小结与讨论
• 第四章 聚酰胺树脂纯化皱皮柑果皮中总黄酮的工艺研究
• 1 试验材料、仪器与试剂
• 1.1 试验材料与试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 树脂的预处理
• 2.2 装柱
• 2.3 聚酰胺树脂对橘皮总黄酮的静态吸附与解吸试验
• 2.3.1 聚酰胺树脂对橘皮黄酮的吸附率测定
• 2.3.2 聚酰胺树脂对橘皮黄酮的解吸率测定
• 2.3.3 聚酰胺树脂的吸附动力学特征
• 2.4 聚酰胺树脂对橘皮总黄酮的吸附—解吸工艺研究
• 2.4.1 上样流速的确定
• 2.4.2 水洗体积的考察
• 2.4.3 洗脱剂浓度的选择
• 2.4.4 洗脱流速的确定
• 2.4.5 洗脱剂用量的确定
• 3 结果与分析
• 3.1 聚酰胺树脂对橘皮黄酮的静态吸附与解吸试验结果
• 3.2 聚酰胺树脂静态吸附动力学曲线
• 3.3 聚酰胺树脂对橘皮总黄酮的吸附—解吸工艺条件研究
• 3.3.1 上样流速的确定
• 3.3.2 水洗体积的考察
• 3.3.3 洗脱剂浓度的选择
• 3.3.4 洗脱流速的确定
• 3.3.5 洗脱剂用量的确定
• 4 小结与讨论
• 第五章 皱皮柑果皮中总黄酮的初步鉴定
• 1 试验材料、仪器与试剂
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器和试剂
• 2 试验方法
• 2.1 化学检识
• 2.1.1 样品溶液的制备
• 2.1.2 显色反应
• 2.2 高效液相色谱（HPLC）检测
• 2.2.1 混合对照品溶液的制备
• 2.2.2 样品溶液的制备
• 2.2.3 色谱条件
• 2.2.4 标准工作曲线的绘制
• 2.2.5 样品总黄酮含量的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 显色反应结果
• 3.2 混合对照品和样品的HPLC图谱
• 3.3 标准工作曲线和方程
• 3.3.1 柚皮苷的标准工作曲线
• 3.3.2 橙皮苷的标准工作曲线
• 3.3.3 新橙皮苷的标准工作曲线
• 3.3.4 对照品的标准曲线方程
• 3.4 样品中总黄酮的含量
• 4 小结与讨论
• 全文结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介