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CD4～+CD25～+调节性T细胞在母胎耐受中作用的探索性研究

2020-11-23阅读(700)

CD4～+CD25～+调节性T细胞在母胎耐受中作用的探索性研究

论文摘要

目的：研究正常妊娠不同孕期及子痫前期、原因不明反复自然流产、体外受精与胚胎移植孕妇外周血及脐血中CD4+CD25+Tr细胞的比例变化，探讨CD4+CD25+Tr细胞在妊娠中的作用。研究CD4+CD25+Tr细胞的特征性标志FoxP3及NRP-1及其它免疫相关分子（CXCR4／SDF-1、IDO、HLA-G、CTLA-4等）在母胎界面的表达情况，初步探讨其在母胎耐受中的作用。研究雌激素对混合淋巴细胞培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的影响。方法：应用流式细胞技术检测孕妇外周血及脐血中CD4+CD25+Tr细胞的比例变化；分别应用原位杂交法、免疫组化、Westernblot、RT-PCR、Real-time PCR法检测母胎界面胎盘组织中FoxP3、NRP-1、IDO、HLA-G、CXCR4／SDF-1、CTLA-4等表达情况。混合淋巴细胞培养体系（C57BL／6小鼠脾细胞作为反应细胞，与BALB／C小鼠脾细胞混合）中加入17-β-雌二醇，培养24小时，经荧光抗体标记后，流式细胞仪检测反应细胞的增殖及培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的变化，并用Real-time PCR法检测培养体系中FoxP3 mRNA的表达。结果：正常妊娠过程中孕妇外周血中CD4+CD25+Tr细胞比例呈规律性变化：妊娠早期较高，中期升至最高，分娩时降至最低，低于正常孕龄非妊娠妇女（P＜0.05）；反复不明原因自然流产者与正常妊娠分娩时比例接近，低于正常妊娠早期（P＜0.05）；子痫前期患者CD4+CD25+Tr细胞比例较低，低于同孕期的正常妊娠（P＜0.05）；体外受精与胚胎移植术成功者CD4+CD25+Tr细胞比例明显高于未成功者（P＜0.05）。胎盘／绒毛组织中有FoxP3、NRP-1、IDO、HLA-G、CXCR4／SDF-1、CTLA-4的表达且这些免疫相关分子的表达变化趋势与CD4+CD25+T细胞比例变化一致。体外试验中与雌激素共同培养后，混合淋巴细胞培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的比例明显升高（P＜0.05），FoxP3 mRNA表达明显增加（P＜0.05）。结论：CD4+CD25+Tr细胞在正常妊娠的免疫耐受中发挥重要作用；胎盘局部表达的免疫相关分子对于维持CD4+CD25+Tr细胞所产生的母胎耐受起一定作用；CD4+CD25+Tr细胞比例降低可能与一些免疫异常相关妊娠（不明原因反复自然流产、子痫前期等）发病有关；雌激素可诱导CD4+CD25+Tr细胞产生，促进混合淋巴细胞培养体系中FoxP3表达，这可能是雌激素诱导妊娠免疫耐受的途径之一。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 第一部分 材料与方法
  • +CD2+5Tr细胞比例的变化'>一、孕妇外周血及脐血中CD4+CD2+5Tr细胞比例的变化
  • 1.1 主要试剂和仪器
  • 1.2 标本采集
  • 1.3 实验方法
  • 1.4.统计学处理
  • 二、胎盘组织中FoxP3等一系列免疫相关分子表达的变化
  • 2.1 主要试剂和仪器
  • 2.2 标本采集
  • 2.3 实验方法
  • 2对混合淋巴细胞培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的影响'>三、E2对混合淋巴细胞培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的影响
  • 3.1 主要试剂和仪器
  • 3.2.实验动物
  • 3.3.实验方法
  • 3.4.统计学处理
  • 第二部分 结果
  • 4+CD25+Tr细胞的变化'>一、孕妇外周血及脐血中CD4+CD25+Tr细胞的变化
  • 二、胎盘组织中一系列免疫相关分子的表达
  • 2.1 原位杂交检测结果
  • 2.2 免疫组织化学检测结果
  • 2.3 westernblot结果
  • 2.4 RT-PCR及Real-time PCR结果
  • +CD25+Tr细胞比例的影 响'>三、雌激素对混合淋巴细胞培养体系中细胞增殖和CD4+CD25+Tr细胞比例的影 响
  • 3.1 雌激素对细胞增殖的影响
  • +CD25+Tr细胞的比例的影响'>3.2 雌激素对混合淋巴细胞培养体系中CD4+CD25+Tr细胞的比例的影响
  • +CD25+脾细胞中Foxp3的表达'>3.3.与雌激素共培养后C57BL/6小鼠CD4+CD25+脾细胞中Foxp3的表达
  • 第三部分 讨论
  • 母胎耐受概述
  • +CD25+Tr细胞与母胎耐受'>CD4+CD25+Tr细胞与母胎耐受
  • 关于雌激素发挥免疫调节作用的分子机制
  • 小结与展望
  • 参考文献
  • 附录一 综述一
  • 附录二 综述二
  • 附录三 在校期间发表文章
  • 主要缩略词
  • 致谢

    • 相关论文文献

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