利用BALB/C小鼠及其原代培养心肌细胞研究川金丝猴源CVB3的致病性

论文摘要

柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）属于小RNA病毒科,肠道病毒属的成员,自1948年发现以来,在人群中的感染普遍存在,是近年来引起关注的人类病毒性心肌炎的一种主要病原之一,而且在国内外人群中的发病呈上升趋势。CV可分为A、B两个型,即CVA和CVB,其中,CVB又有6个血清型（CVB1CVB6）。除人类外,CVB还可感染猩猩和比格犬等动物,并导致死亡。2005年,本课题组对临床死亡的金丝猴进行系统的诊断,证实其死于CVB3感染,这是国内外首次有该病原感染金丝猴死亡的报道。多数资料报道CVB3具有嗜心肌性,主要侵犯心肌并造成其损伤,但是,有的毒株还可导致胰腺、肾脏、神经以及子宫等组织器官损伤,也有部分毒株甚至没有致病性。由此可见,不同的分离毒株感染后其致病性不尽相同。为了明确川金丝猴源CVB3（CVB3/SGM-05）这一新分离毒株的致病特性,本研究以BALB/C小鼠为实验动物,开展相关的致病性研究。本研究以新生BALB/C小鼠的心脏为材料,分离培养其心肌细胞,经形态学观察及其心肌生长特性鉴定,确定已成功建立了一种原代心肌细胞培养方法。为研究具有嗜心肌性病毒的致病机制研究提供良好的实验体系。将CVB3/SGM-05毒株接种原代培养的小鼠心肌细胞,染毒细胞出现明显的细胞病变,而且失去心肌细胞特有的节律收缩现象。将该染毒细胞制作超薄切片后电镜观察发现,在胞浆内有大量的CVB3病毒粒子形成的晶格状结构,说明该病毒可感染原代培养的小鼠心肌细胞,并可在其中进行大量的复制,初步明确CVB3/SGM-05毒株对原代心肌细胞的超微病变。将CVB3/SGM-05毒株通过腹腔注射途径接种健康的BALB/C小鼠后,观察该病毒对小鼠的致病性。小鼠于接毒后60h开始死亡,发病小鼠均出现典型的结膜炎,死亡率高达80%以上。对死亡小鼠剖检可见:最明显的病变为腹腔内脂肪的大量坏死;肝脏明显肿大,表面可见针尖大灰白小点;部分小鼠的脾脏肿大、边缘与坏死的脂肪发生粘连。石蜡病理组织切片显示,脂肪坏死尤其明显;心、肝、肾等实质器官均有不同程度的细胞变性,肝细胞坏死严重;脑组织可见轻度淤血;胃、肠黏膜上皮坏死、脱落。说明CVB3分离毒株感染BALB/C可引起多脏器的损伤。对死亡小鼠的心肌制作组织超薄切片,电镜观察显示,无明显的病变。将接种CVB3/SGM-05毒株的BALB/C小鼠于不同时间采集血液,分离血清后检测其中的心肌酶、肝功、肾功、血糖以及胰淀粉酶的变化。结果显示,血清中被检的酶类随着病程的发展呈现出一定的变化特点,如心肌酶CK于接毒后第2天即升高到正常值的2倍左右,7天后可达到3倍以上,之后呈逐渐下降趋势;而HBD于接毒后第2天即升高到正常值的4倍以上,以后逐渐下降。小鼠肝功能相关酶类变化不显著。肾功能相关的BUN无显著变化等。这些检测结果与CVB3标准毒株感染BALB/C小鼠后的血清酶学指标存在一定的差异,提示临床诊断CVB3感染时,除酶学指标外应综合分析。该项研究从细胞病理、组织病理及血液病理等多个方面研究了CVB3/SGM-05毒株对BALB/C小鼠的致病特性,不仅为CVB3感染的临床综合诊断提供一定的参考,而且为下一步建立CVB3/SGM-05毒株感染的实验动物模型奠定了坚实的基础。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 文献综述
• 第1章 柯萨奇B3 病毒研究进展
• 1.1 柯萨奇病毒的形态结构及生物学特性
• 1.2 CVB3 基因组结构及其编码产物的功能
• 1.3 柯萨奇病毒的致病机制
• 1.4 柯萨奇病毒流行病学特点
• 1.5 柯萨奇病毒的检测技术
• 1.6 小结
• 第2章 柯萨奇病毒与病毒性心肌炎的研究进展
• 2.1 柯萨奇病毒致病毒性心肌炎致病机制
• 2.2 柯萨奇病毒的信号传导通路
• 2.3 小结
• 研究内容
• 第1章 新生乳鼠心肌细胞的原代培养及川金丝猴源柯萨奇B3 病毒感染试验
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 川金丝猴源CVB3 感染BALB/C 小鼠的病理形态学观察
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 川金丝猴源CVB3 感染BALB/C 小鼠的血液学指标变化特征
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的学术论文
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 导师及作者简介