香蕉枯萎病菌的拮抗菌筛选及特性研究

论文摘要

香蕉枯萎病4号生理小种(以下简称FOC4)引发的香蕉枯萎病在国内持续蔓延,危害急剧加深。生防微生物的来源决定了其在香蕉体内的定殖能力的强弱、定殖量的大小,从而决定了其对于香蕉枯萎病的防治效果的差别。本实验从香蕉组培苗根部提取菌株,用于拮抗香蕉枯萎病菌4号生理小种。获得有拮抗FOC4的可定殖的菌株,从而可以有效的从根部来抑制枯萎病的侵入。从1461袋香蕉组培苗内提取到2482株菌株,经筛选、鉴定后确定了18株对4号小种有明显拮抗作用的菌株,通过连续的PDA平板对峙培养,证明了菌株对4号生理小种拮抗作用的稳定性,并进行了16SrDNA鉴定。对其菌株进行了分析鉴定,发现拮抗菌株主要为芽孢杆菌,相互间具有一定的亲缘关系。选择其中两株拮抗效果较好的菌株(编号分别为0165和1150)进行了香蕉的防治枯萎病的研究。利用筛选的抗利福平突变体检测了在香蕉体内的定殖能力,发现这2株菌株可以在香蕉植株根部至少存活达40d之久。使用多菌灵作为阳性对照,在PDA平板上进行对峙培养,发现0165和1150的发酵液内的成分经稀释60倍后其对FOC4的抑制效果基本相当于稀释700倍的多菌灵。2个菌株对拮抗菌株的抑制作用并非营养竞争,其中0165发酵液内的蛋白质经提纯后对FOC4具有拮抗性,抑菌率仅为有发酵液过滤后的67%,并且效果持续时间约为3 d。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 序言
• 1.1 我国香蕉产业现状
• 1.2 香蕉枯萎病概述
• 1.2.1 国内种植区发病情况及危害
• 1.2.2 发病因素及特点
• 1.2.3 传统防控措施
• 1.2.4 国内外的解决方法
• 1.2.5 限制枯萎病生防菌作用的因素
• 1.3 香蕉枯萎病的主要生防菌
• 1.3.1 真菌
• 1.3.2 细菌
• 1.3.3 放线菌
• 第二章 材料与方法
• 2.1 内生菌的分离与纯化
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 分离材料的选取
• 2.1.3 方法
• 2.2 拮抗菌株的筛选
• 2.2.1 FOC4的活化与复壮
• 2.2.2 PDA平板对峙
• 2.2.3 拮抗活性稳定性的测定
• 2.3 拮抗菌株的鉴定
• 2.3.1 拮抗菌株基因组序列的提取
• 2.3.2 16SrDNA片段扩增
• 2.3.3 PCR产物的凝胶电泳
• 2.3.4 目标片段回收
• 2.3.5 回收片段检测
• 2.3.6 测序
• 2.4 拮抗菌室内抑菌效果及与多菌灵抑菌效果的比较
• 2.4.1 室内抑菌效果
• 2.4.2 与多菌灵抑菌效果的比较
• 2.4.3 0165发酵液拮抗物质的来源
• 2.5 香蕉枯萎病拮抗菌在香蕉体内的定殖
• 2.5.1 材料
• 2.5.2 拮抗菌0165和1150抗Rif突变体筛选
• 第三章 结果与分析
• 3.1 菌株的分离结果
• 3.2 拮抗菌株的筛选
• 3.2.1 FOC4的活化和复壮
• 3.2.2 筛选
• 3.3 拮抗菌株16SrDNA的鉴定
• 3.4 拮抗菌室内抑菌效果及阳性对照
• 3.4.1 室内抑菌效果
• 3.4.2 阳性对照
• 3.4.3 0165发酵液拮抗物质的来源
• 3.5 香蕉枯萎病拮抗菌在香蕉体内的定殖
• 3.5.1 0165和1150抗Rif突变体筛选及抑菌作用的测定
• 3.5.2 土壤微生物在Rif抗性培养基上的适应性
• 3.5.3 1150-r和0165-r在根部土壤中的消长动态
• 3.5.4 0165-r和1150-r在香蕉根内的定殖及消长动态
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 附录