Rho/Rock信号转导通路在压力超负荷性大鼠左室重构中的作用及其抑制剂法舒地尔干预影响

论文摘要

目的1.观察RhoA, Rho激酶1（Rock1）mRNA在压力负荷性大鼠心肌中的表达情况,探讨小G蛋白Rho/Rock信号转导通路与压力负荷性大鼠左心室重构的关系。2 .观察Rho激酶抑制剂法舒地尔（fasudil）对心肌组织RhoA, Rock1mRNA表达、转化生长因子-β2及III型胶原含量的干预作用,探讨法舒地尔对压力负荷性大鼠左心室重构的影响及其可能机制。方法1.32只SD大鼠随机选取8只,作为假手术组,将其余的24只大鼠进行腹主动脉缩窄手术,造模1周后将造模大鼠随机分为2组,模型组和法舒地尔药物干预组,每组各12只。法舒地尔组法舒地尔5mg/kg,腹腔注射,每天两次,假手术组、模型组以等量生理盐水腹腔注射。自腹主动脉缩窄术后1周起各组给药,共4周。2.观察期间,法舒地尔组死亡1只。观察期满后,将动物处死后,准确秤取体重、全心湿重（HWW）、左心室游离壁湿重（LVFWW）,根据LVFWW、左室肥厚指数（LVHI）、HWW作为判断是否存在心肌肥厚的指标。光镜HE染色和免疫组化方法检测Ⅲ型胶原观察心肌细胞和间质的变化,作为心肌重构的形态学检测指标。处死前测量大鼠尾动脉压,左室舒张末压（LVDEP）,左室收缩压（LVSP）,评价左室功能。逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测RhoA, Rock1mRNA的表达,计算RhoA, Rock1mRNA与β-actin mRNA的灰度比值。免疫组化方法检测心肌转化生长因子-β2（TGF-β2）,计算平均光密度（IOD）。结果1.大鼠一般情况:假手术组大鼠毛色有光泽,双目灵活有神,行动敏捷,对周围变化反应灵敏;模型组大鼠后期毛色逐渐失去光泽,精神萎靡,行动迟缓,倦卧;法舒地尔组大鼠一般状态较模型组好。2.心肌重构的形态学与组织学指标:模型组和法舒地尔药物干预组的HW、LVFWW、LVHI均高于假手术组（p<0.01）。模型组心肌细胞变性,出现局灶性、片状坏死,心肌纤维粗大断裂,心肌细胞核固缩,间质明显水肿;法舒地尔药物干预组心肌细胞肥大,轻度变性,心肌纤维无断裂,心肌细胞核形状略不整,心肌间质轻度水肿。模型组大鼠心肌Ⅲ型胶原IOD（127.10±2.70）明显增高,与假手术组（74.12±0.74）比较有极显著的差异;法舒地尔干预后Ⅲ型胶原IOD（91.37±1.58）,较模型组比较有明显的下降（P<0.01）。3.血流动力学指标检测:观察期满后,模型组LVSP（149.80±8.40 VS 102.72±7.40）、LVEDP（4.48±0.83 VS 1.85±0.92）明显增加,与假手术组相比,两者间存在显著差异（P<0.01）,法舒地尔组治疗4周后,LVSP（121.20±7.60mmHg）、LVEDP（3.70±0.72mmHg）较模型组明显降低（P<0.01）,模型组大鼠尾动脉压较假手术组亦有所升高,法舒地尔组尾动脉较模型组低,但两组间差异不明显。4.心肌组织TGF-β2检测:转化生长因子-β2的含量在模型组亦明显升高（IOD为20.46±1.79）,与假手术组（5.02±0.14）比较,两者间存在显著差异（P<0.01）;法舒地尔治疗后可以明显抑制转化生长因子-β2的表达（12.17±0.82）,与模型组比较,两者存在明显差异（P<0.01）。5.心肌组织RhoA, Rock1mRNA的表达:以β-actin为内参对照,结果以RhoA mRNA、Rock1mRNA与β-actin mRNA灰度值的比值表示。模型组灰度值较假手术组（RhoA mRNA1.42±0.08 VS 0.69±0.05,Rock1mRNA1.29±0.04 VS 0.58±0.02）明显升高,二者之间存在著差异性（P<0.01）。法舒地尔组经药物干预4周后,其RhoA mRNA灰度值（0.85±0.03）、Rock1mRNA灰度值（0.83±0.03）与模型组比较明显降低,两者之间差异亦十分显著（P <0.01）。且RhoA, Rock1mRNA的表达与左室重量、左室肥厚指数呈正相关。结论1. Rho/Rock信号转导通路与压力超负荷大鼠心肌重构的发生发展密切相关。2. Rho激酶抑制剂fasudil能抑制Rho/Rock信号转导通路的活性,抑制心室重构;抑制TGF—β2表达,减轻心肌纤维化是其抗心室重构的重要机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述