cNOS和iNOS在肉鸡肺动脉高压综合征中的作用研究

论文摘要

肉鸡肺动脉高压综合征（pulmonary hypertension syndrome,PHS）,又称肉鸡腹水综合征（ascites syndrome of broilers,ASB）在临床上是以明显腹水,右心扩张,肺充血、水肿以及肝肿大为特征的一种综合征,此病多发于3～4周龄的肉鸡,发病率在某些地区可达60%以上,死亡率高达42%。大多数学者认为由血管舒张因子和血管收缩因子动态平衡破坏所引起的肺动脉高压是PHS形成的中心环节。一氧化氮（nitric oxide,NO）是内皮依赖性血管舒张因子（endothelium-derived relaxing factor,EDRF）的代表,其由一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）作用于L—精氨酸（L-arginine,L-Arg）所产生。本研究通过两组试验阐明原生型一氧化氮合酶（constitutive NOS,cNOS）和诱导型一氧化氮合酶（inducible NOS,iNOS）在PHS发病过程中的作用:（1）试验一分别测定21、28、35和42日龄肺动脉高压腹水组肉鸡（S组）、肺动脉高压组肉鸡（M组）和正常对照组肉鸡（C组）的腹水心脏指数（ascites heart index,AHI）、全心与体重比、平均肺动脉压（mean pressure of pulmonary artery,mPAP）、血清NO含量、肺脏和血清的cNOS和iNOS活性。（2）试验二将健康肉鸡分为L-AG处理组和对照组,分别在注射iNOS抑制剂—L-氨基胍（L-Aminoguanidi,L-AG）或生理盐水1、2和4小时后,测定mPAP及其血清中iNOS活性、cNOS活性、NO含量、红细胞压积（packed cell volume,PCV）、电解质浓度、pH、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性和丙二醛（methylenedioxyamphetamin,MDA）含量。试验一结果表明:（1）S组和M组全心与体重比值以及S组血清NO含量均从28日龄显著或极显著高于C组（P<0.01或P<0.05）;（2）S组肺组织cNOS活性显著或极显著低于C组（P<0.01或P<0.05）;（3）S组肺组织iNOS在21、35和42日龄显著或极显著高于C组（P<0.01或P<0.05）;（4）S组从28日龄起血清cNOS和iNOS与C组差异显著或极显著（P<0.01或P<0.05）;（5）正常肉鸡血清iNOS活性在21、35和42日龄均显著或极显著低于血清cNOS活性（P<0.01或P<0.05）。试验一研究结果提示cNOS和iNOS活性的变化与PHS发病机理有着密切的关系。试验二结果显示:（1）L-AG处理组mPAP、NO含量和iNOS活性均显著或极显著低于对照组（P<0.01或P<0.05）;（2）PCV和Ca2+在给药后2h和4h与对照组

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词汇表
• 前言
• 1. 一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的研究进展
• 1.1 一氧化氮
• 1.1.1 一氧化氮生物信使作用的发现
• 1.1.2 一氧化氮的生物合成
• 1.1.3 一氧化氮分子水平的作用
• 1.1.4 一氧化氮的代谢
• 1.1.5 一氧化氮的细胞毒作用
• 1.1.6 一氧化氮合成的调节
• 1.2 一氧化氮合酶
• 1.2.1 三种同功酶的存在部位
• 1.2.2 三种同功酶的生理学特性
• 1.2.3 三种同功酶的基因序列分析
• 1.3 一氧化氮合酶抑制剂
• 1.3.1 氨基酸类一氧化氮合酶抑制剂
• 1.3.2 非氨基酸类一氧化氮合酶抑制剂
• 2. 缺氧性肺动脉高压
• 2.1 人类肺动脉高压
• 2.1.1 急性缺氧时体内NO的代谢
• 2.1.2 慢性缺氧时体内NO的代谢
• 2.1.3 慢性缺氧时体内eNOS的活性
• 2.1.4 慢性缺氧时体内iNOS的活性
• 3. 肉鸡肺动脉高压综合征
• 3.1 肉鸡肺动脉高压综合征诱因
• 3.1.1 环境因素
• 3.1.2 性别因素
• 3.1.3 光照因素
• 3.1.4 大肠杆菌感染因素
• 3.2 肉鸡肺动脉高压综合征发病机制
• 3.3 肉鸡肺动脉高压综合征试验模型的复制
• 3.3.1 高钠诱导肺动脉高压法
• 3.3.2 甲状腺素诱导肺动脉高压
• 3.3.3 低温诱导肺动脉高压
• 3.3.4 单侧结扎肺动脉低温诱导肺动脉高压
• 3.3.5 低氧诱导肺动脉压
• 3.4 一氧化氮和一氧化氮合酶与肉鸡肺动脉高压综合征
• 研究目的
• 试验研究
• 试验一 PHS发病肉鸡血清和肺脏iNOS和cNOS活性变化
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物与分组
• 1.2 主要仪器
• 1.3 样品的采集与处理
• 1.3.1 血清样品制备
• 1.3.2 肺组织匀浆的制备
• 1.4 测定项目与方法
• 1.4.1 平均肺动脉压（mPAP）测定
• 1.4.2 腹水心脏指数测定
• 1.4.3 全心与体重比值（TV/BW）
• 1.4.4 血清和肺组织NOS亚型活性的测定
• 1.4.4.1 血清NOS活力计算
• 1.4.4.2 肺组织NOS活力测定
• 1.4.5 血清NO含量测定
• 1.4.6 肺组织总蛋白含量的测定
• 1.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 mPAP、AHI和TV/BW的变化
• 2.2 NO的变化（nmol/mL）
• 2.3 肺内iNOS和cNOS活性的变化（U/mg·prot）
• 2.4 血清内iNOS和cNOS活性的变化（U/mL）
• 2.5 正常肉鸡血清及肺脏内cNOS和iNOS的比较
• 3 讨论
• 3.1 AHI、TV/BW比和mPAP与PHS的关系
• 3.2 PHS肉鸡cNOS和iNOS的变化规律
• 3.3 NO在肉鸡PHS发展过程中的变化和NO对肉鸡PHS的影响
• 试验二 静脉注射L-氨基胍对肉鸡肺动脉压及其相关指标影响的研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物分组及处理
• 1.2 主要仪器与试剂
• 1.3 样品的采集与制备
• 1.4 测定项目与方法
• 1.4.1 mPAP的测定
• 1.4.2 PCV的测定
• 2+、Na⁺、K⁺和Cl^-浓度及pH值测定'>1.4.3 血清ca²+、Na⁺、K⁺和Cl^-浓度及pH值测定
• 1.4.4 血清NO含量的测定
• 1.4.5 血清cNOS和iNOS活性的测定
• 1.4.6 血清SOD活性的测定
• 1.4.7 血清丙二醛含量的测定
• 1.4.8 血清过氧化氢酶活性的测定
• 1.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 NO浓度的动态变化
• 2.2 cNOS和iNOS活性的动态变化
• 2.3 生理生化指标的的动态变化
• 2.4 电解质浓度和PH值的动态变化
• 2.5 SOD、CAT和MDA的动态变化
• 3 讨论
• 3.1 L-AG对NOS活性和NO含量的影响
• 3.2 iNOS对mPAP的影响
• 3.3 iNOS对电解质浓度的影响
• 3.4 iNOS对PCV的影响
• 结论
• 1.cNOS和iNOS活性变化在本病形成中的意义
• 2. 短期给予L-AG后可引起正常肉鸡mPAP升高
• 参考文献
• 致谢
• 附录 1
• 附录 2