论文摘要
目的: 构建免疫毒素IL-18-PE38融合基因真核表达重组载体,并研究该重组质粒对IL-18受体超表达的白血病及类风湿性关节炎是否有治疗作用。方法与结果: （1） 通过限制性内切酶双酶切从质粒PRKL459K-IL18-PE38中获取IL18-PE38融合基因,将其与分泌性真核表达载体pSecTag2B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,EcoRI单酶切后电泳鉴定显示所构建真核表达载体pSecTag2B-IL-18—PE38片段长度约为6.8kb。DNA测序结果显示IL-18和PE38序列与基因文库中报道序列相符。 （2） 脂质体转染法将构建的真核表达质粒转染入3T3细胞,荧光免疫细胞化学法荧光显微镜照片显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。转染之3T3细胞用Zeocin筛选纯系转染阳性细胞,筛选50天后,空白组细胞死亡,对照组与转染组存活细胞成克隆性生长。采用斑点ELLSA和Western-blot法鉴定细胞培养上清,证实细胞培养上清中有融合蛋白表达。将上清作用于白血病L615细胞株,MTT法测定细胞生长情况,结果显示转染重组基因组细胞死亡率高于转染空载体对照组。流式细胞术检测结果示转染重组基因组可见明显凋亡峰。AO/EB荧光双染色荧光显微镜照片显示转染组较对照组呈现明显凋亡细胞染色特征。
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