论文摘要
本研究首先从牛粪便中分离纯化微小隐孢子虫,提取虫体总核酸,通过RT-PCR的方法,对微小隐孢子虫病毒全基因组序列进行了测定,将该基因组登陆GenBank获得的登陆号为EU183403与EU183404。在此基础上根据CPV基因组（EU183403与EU183404）的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,参照相关病毒转染载体的构建策略,将绿色荧光蛋白基因分别替换L-dsRNA与S-dsRNA的部分编码区,构建微小隐孢子虫病毒转染载体,用T7 RNA聚合酶获得了高质量的体外转录体,将每一种的体外转录体单独或其两者的混合物,经电穿孔技术转染隐孢子虫卵囊,37℃5%CO2温箱中孵育18h后,能观察到卵囊和子孢子发出绿色荧光,卵囊的发光率都约为10%。提取转染后虫体的总核酸,用RT-PCR方法检测到了GFP的mRNA,表明成功构建了微小隐孢子虫病毒转染载体,为进一步研究微小隐孢子虫的分子生物学特性及其基因表达调控研究奠定了基础。