拮抗放线菌E001菌株对蔬菜灰霉病的生物防治

论文摘要

蔬菜灰霉病是一种世界性的真菌病害,经常可以造成大棚蔬菜特别是番茄的毁灭性危害。由于该病菌对化学杀菌剂很容易产生抗药性,而且长期大量使用化学农药,造成环境污染。本文从土壤中分离并筛选出对灰霉病菌具有拮抗作用的生防放线菌E001菌株,并对该菌株进行鉴定,研究了菌株的发酵条件、发酵滤液的稳定性,初步研究了拮抗菌株产生的抑菌物质对灰霉病菌的作用方式,以及对灰霉病的生防效果,得到如下结果：1.从4种土样中筛选获得了420株放线菌,通过对峙培养初步筛选出15个对灰霉病菌具有较强拮抗作用的放线菌菌株,其中菌株E001不仅对灰霉病菌的拮抗作用强,还对其他植物病原真菌（如水稻纹枯病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等）也有拮抗作用,同时,E001菌株的发酵滤液对灰霉病菌有拮抗作用,因此,E001菌株可作为防治灰霉病的候选放线菌菌株。2.依据放线菌鉴定的方法,E001菌株的培养特征、形态学特征、生理生化特征符合链霉菌（Streptomyces sp.）的特征。16S rDNA序列测定结果表明,E001菌株与疮痂病链霉菌（Streptomyces scabies）相似度最高,因此,将该放线菌菌株归为疮痂病链霉菌。3.放线菌E001菌株发酵条件试验结果表明,E001菌株的最佳发酵培养基为小米浸汁培养基,最佳发酵条件为：发酵培养基初始pH为7.5,发酵温度为28℃发酵时间为4d,碳源为蔗糖,氮源为牛肉膏,接种量为6%,摇床转速为220r/min。4.放线菌E001菌株抑菌活性物质的稳定性试验结果表明,E001菌株发酵滤液对紫外线的稳定性较好。E001菌株发酵滤液的抑菌活性随外界环境温度的升高,活性逐渐降低。E001菌株发酵滤液在自然pH （pH6.5）条件下,抑菌活性最高,pH值的增大或降低,都会影响发酵滤液的抑菌活性。贮藏稳定性则表现为低温贮存更有利,但超过20d也对活性有影响。5.E001菌株对灰霉病菌作用方式的研究结果表明,E001菌株的发酵滤液能够强烈抑制灰霉病菌菌丝的生长,使灰霉病菌菌丝顶端膨大,分枝增多,畸形扭曲,菌丝体出现空泡,细胞壁破损,甚至消解。E001菌株发酵滤液对灰霉病菌分生孢子萌发有强抑制作用,分别稀释2倍、10倍时,对灰霉病菌分生孢子萌发的抑制率为99.37%、97.31%。6.E001菌株发酵滤液对离体叶片、果实上灰霉病的预防效果均在99%以上,其中,对黄瓜果实灰霉病的预防效果显著高于50%多菌灵可湿性粉剂500倍液的处理；治疗效果也较好（56.75%-76.81%）。温室盆栽试验中,E001菌株发酵滤液对番茄植株上的灰霉病均有显著的预防效果和治疗效果,处理后10d时的预防效果达94.77%,治疗效果达93.84%,显著高于50%多菌灵可湿性粉剂500倍液处理（55.81%和68.42%）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 蔬菜灰霉病的化学防治研究进展
• 2 植物病害的生物防治
• 2.1 植物病害生物防治现状
• 2.2 植物病害生防菌的生物防治机理
• 2.2.1 直接拮抗作用
• 2.2.2 诱导植物产生抗病作用
• 2.2.3 捕食作用
• 3 放线菌防治植物病害的研究现状
• 3.1 放线菌在植物病害生物防治中的应用
• 3.2 放线菌对蔬菜灰霉病的生物防治
• 3.3 放线菌应用方式及其生防作用
• 3.3.1 抗生菌的直接利用
• 3.3.2 抗生素的利用
• 3.3.3 酶等其它代谢物的利用
• 4 研究目的和意义
• 第二章 拮抗放线菌的分离与筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 土样来源
• 1.3 培养基
• 1.4 土壤中放线菌的分离
• 1.5 土壤中分离放线菌活菌计数
• 1.6 拮抗放线菌的筛选
• 1.7 拮抗放线菌的抗菌谱测定
• 1.8 放线菌的发酵滤液对灰霉病菌的拮抗效果测定
• 2 结果与分析
• 2.1 拮抗放线菌的分离与初级筛选
• 2.1.1 每克土壤中含有的总活菌数
• 2.1.2 四种土样中分离出放线菌的总数目及拮抗放线菌的筛选
• 2.2 拮抗放线菌对7种植物病原菌的抗菌谱测定
• 2.3 放线菌发酵滤液对灰霉病菌的拮抗作用
• 3 小结与讨论
• 第三章 放线菌E001菌株的种类鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.2.1 形态及培养特征观察培养基
• 1.2.2 生理生化特性试验培养基
• 1.3 培养特征观察
• 1.4 形态学观察
• 1.5 生理生化特性测定
• 1.5.1 明胶液化试验
• 1.5.2 牛奶凝固与胨化试验
• 1.5.3 淀粉酶的活性测定
• 1.5.4 纤维素生长试验
• 1.5.5 产硫化氢试验
• 1.5.6 碳源的利用试验
• 1.6 放线菌E001菌株的分子生物学鉴定
• 1.6.1 PCR扩增及测序
• 1.6.2 序列比对和进化树的构建
• 2 结果与分析
• 2.1 E001菌株在不同培养基上的培养特征
• 2.2 E001菌株的形态
• 2.3 E001菌株的生理生化特性
• 2.4 E001菌株的16S rDNA序列测定结果
• 3 小结与讨论
• 第四章 E001菌株发酵条件和发酵滤液拮抗活性稳定性
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 种子液的制备
• 1.4 E001菌株的液体培养与发酵滤液的制备
• 1.5 E001菌株发酵滤液的抑菌活性测定
• 1.6 初步优化E001菌株的发酵培养基和发酵条件
• 1.6.1 发酵培养基
• 1.6.2 发酵时间
• 1.6.3 碳、氮源
• 1.6.4 发酵培养基的初始pH值
• 1.6.5 接种量
• 1.6.6 发酵温度
• 1.6.7 摇床转速
• 1.7 E001菌株发酵滤液拮抗活性的稳定性测定
• 1.7.1 不同温度处理的稳定性测定
• 1.7.2 不同pH值处理的稳定性测定
• 1.7.3 紫外线处理的稳定性测定
• 1.7.4 贮存时间的稳定性测定
• 2 结果与分析
• 2.1 E001菌株的发酵培养基和发酵条件筛选结果
• 2.1.1 发酵培养基对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.2 发酵时间对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.3 碳氮源对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.4 培养基的初始pH值对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.5 接种量对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.6 培养温度对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.1.7 摇床转速对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.2 E001菌株发酵滤液拮抗活性的稳定性测定结果
• 2.2.1 温度对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.2.2 酸碱度对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.2.3 紫外线对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 2.2.4 贮存时间对E001菌株发酵滤液抑菌活性的影响
• 3 小结与讨论
• 3.1 E001菌株的发酵条件
• 3.2 E001菌株发酵滤液拮抗活性的稳定性
• 第五章 E001菌株对灰霉病菌的作用方式及对灰霉病的防治效果
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 E001菌株发酵滤液对灰霉病菌菌丝的影响
• 1.2.1 液体振荡培养
• 1.2.2 PDA平板接触培养
• 1.3 E001菌株发酵滤液对灰霉病菌分生孢子萌发的影响
• 1.4 E001菌株发酵滤液在离体叶片上对灰霉病的防治效果测定
• 1.5 E001菌株发酵滤液在黄瓜果实上对灰霉病的防治效果测定
• 1.6 E001菌株发酵滤液在番茄植株上对灰霉病的防治效果测定
• 1.7 病情指数及防效计算公式
• 2 结果与分析
• 2.1 E001菌株发酵滤液对番茄灰霉病菌菌丝生长的影响
• 2.2 E001菌株发酵滤液对番茄灰霉病菌菌丝形态的影响
• 2.3 E001菌株发酵滤液对灰霉病菌分生孢子萌发的影响
• 2.4 E001菌株发酵滤液对莴苣离体叶片灰霉病的防治效果
• 2.5 E001菌株发酵滤液对黄瓜果实灰霉病的防治效果
• 2.6 E001菌株发酵滤液对番茄离体叶片灰霉病的防治效果
• 2.7 E001菌株发酵滤液在盆栽番茄植株上对灰霉病的预防效果
• 2.8 E001菌株发酵滤液在盆栽番茄植株上对灰霉病的治疗效果
• 3 小结与讨论
• 3.1 E001菌株发酵滤液对灰霉病菌的作用方式
• 3.2 E001菌株发酵滤液对灰霉病的防治效果
• 参考文献
• 附录一
• 附录二
• 致谢