shRNA介导IGF-IR基因沉默诱导人肺癌A549细胞凋亡的体内外研究

论文摘要

目的：评价RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体（IGF-IR）表达的阻断效应，以及IGF-IR基因沉默后细胞凋亡相关基因和肿瘤体内外生物学特性的改变。方法：应用U6启动子介导DNA模板转录生成短发夹样RNA（shRNA）并转染人肺癌A549细胞株，经RT-PCR和Western blot检测IGF-IR表达的改变；Western blot检测bcl-2和caspase-3的表达；进一步分析IGF-IR信号通路中Erk和Akt磷酸化程度；MTT法检测体外培养细胞的生长抑制率；流式细胞技术和DNA ladder法检测细胞增殖周期和凋亡易感性变化；荷瘤裸鼠肺癌模型中观察瘤内注射的抑瘤效应及TUNEL法检测瘤内细胞凋亡情况。结果：IGF-IR表达水平明显下降（抑制率高达89.8％），并同步伴随bcl-2表达减少、ERK和Akt磷酸化受抑、caspase-3激活增加；细胞滞留于G0期的比例上升，对酒精诱导的凋亡易感性明显增加；肿瘤细胞活力明显下降；直接瘤内注射能有效抑制肿瘤生长（肿瘤体积减少50％～60％）并促进肿瘤细胞凋亡。结论：运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-IR的表达，使细胞增殖能力减弱，凋亡易感性增加，瘤体生长受抑，抑制IGF-IR产生的抗肿瘤作用可能与其下游通路中有丝分裂原转导途径（ERK）和抗细胞凋亡信号转途径（蛋白激酶B途径）PI3K／Akt-1的活化受抑有关。shRNA介导IGF-IR基因沉默能为肺癌的基因治疗提供新的靶点和思路。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、论文正文
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 6. 参考文献
• 四、综述
• 五、译著
• 六、在研期间发表的论文
• 七、致谢