论文摘要
目的意义:aGVHD是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后影响预后的严重并发症之一。造血干细胞移植后,移植物中免疫效应细胞,包括T淋巴细胞和NK细胞识别受者不同的HLA抗原而增殖分化并对受者的组织器官进行免疫攻击从而发生诸多病理过程,许多细胞因子如TNF-α、IFN-γ等也与此相关联。其中,介导细胞凋亡的Fas/FasL途径,及介导细胞死亡的Perforin/granzyme B途径与aGVHD的诸多病理过程可能密切相关。我们通过竞争性定量RT-PCR的方法动态监测移植后患者体内FasL、Perforin及Granzyme B转录水平的变化,动态观察其与aGVHD发生及发展的相关关系,以期在aGVHD发生的病理阶段前,在细胞凋亡和细胞死亡的分子演变阶段为临床诊断、治疗及提示预后提供有价值的指导,并探讨其对aGVHD提前预测的可能性。 材料和方法:（1）FasL、Granzyme B及Perforin基因竞争模板在T载体中的克隆:通过PCR技术,分别将FasL、Granzyme B及Perforin基因的特异性序列与GAPDH基因序列接合,产生包含有上述基因特异性同源序列的竞争模板。所用引物见第二部分表2-1。再将PCR产物克隆到T载体中,批量合成满足实验要求的竞争模板。（2）目的基因片段获取及FasL、Granzyme B及Perforin竞争性定量RT-PCR方法的建立:移植后10天到2月分11个时间点抽取17名患者抗凝外周血,利用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞,提取RNA,逆转录后,取2μ gcDNA与竞争模板
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标签：竞争性定量论文;