发动相关蛋白1参与糖尿病周围神经病变发病的相关机制研究及格列齐特的干预作用

论文摘要

目的：1.腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立实验性糖尿病大鼠模型，并维持高血糖环境；2.探讨发动相关蛋白1（dynamin-related protein l,Drp1）在糖尿病周围神经病变（Diabetic Peripheral Neuropathy，DPN）中的可能作用机制；3.探讨格列齐特对DPN的干预影响，为临床DPN的治疗提供理论依据。方法：采用1%浓度的STZ一次性腹腔注射法诱导建立糖尿病大鼠模型。72小时后尾静脉取血测空腹血糖，血糖≥16.67mmol/L为造模成功大鼠，并将成模大鼠随机分为模型组（M组）、格列齐特组（G组），另设立窝别、鼠龄和体质量等条件匹配的雄性大鼠为正常对照组（N组）。饲养期间定期监测大鼠体重、血糖情况，做好高血糖大鼠模型的质量控制。8周后，观察大鼠的一般情况，测量体重、血糖及周围神经传导速度（NCV），并留取双侧坐骨神经。左侧坐骨神经切断分别置入10％甲醛溶液和‐80℃冰箱。右侧坐骨神经即刻制成10%组织匀浆，用于氧化应激指标测定。分别采用变色酸2R-亮绿染色法观察形态学变化；免疫组化检测坐骨神经组织中Caspase-3、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）表达量；试剂盒法检测匀浆中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力及Western blotting检测Drp1、Bax和Bcl-2的表达。结果：成模后，与N组相比，M组和G组大鼠血糖明显升高，精神萎靡，活动性差，进食水、尿量均增多，毛发晦暗。8周后，M组和G组大鼠体重较前增加不明显，N组大鼠体重呈生理性增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；M组和G组血糖仍高于N组（P＜0.05），与M组相比，G组血糖明显降低（P＜0.05）；与N组相比，M组形态学改变明显，髓鞘厚度变薄，环形结构不完整，偶可见增生的间质成分，部分髓鞘脱失并出现空泡样改变；M组NCV明显减慢，Drp1、Bax、Bcl-2、Caspase-3、8-OHdG表达及MDA含量均增高，SOD活力减低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与M组相比，格列齐特干预组坐骨神经组织形态学改变及NCV均有改善，Drp1、Bax、Caspase-3、8-OHdG表达及MDA含量均下降，SOD活力增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。Bcl-2表达亦有所下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：Drp1作为线粒体形状调控蛋白在机体氧化应激反应和细胞凋亡过程中发挥重要作用。 Drp1可能通过串联氧化应激和细胞凋亡两大重要发病机制学说，而参与DPN发病。糖尿病大鼠坐骨神经中Drp1高表达，促进活性氧自由基（ROS）生成和凋亡相关因子表达，从而参与并促进神经细胞凋亡。我们推测这可能是DPN重要发病机制之一。格列齐特干预Drp1表达，下调血糖水平及机体氧化应激水平，减少神经细胞损伤和凋亡，对糖尿病周围神经有一定的保护作用。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献