论文摘要
盐渍化是影响农作物生长和产量的最主要因素之一。据估计,盐渍化影响着世界上4×108到9×108公顷的土地,是目前农业生产用地的三倍多。而在我国北方,碱化与盐化往往相伴发生,多为既含有中性盐又含有碱性盐的复合盐碱地,使作物不仅要受盐的胁迫作用,还要受到高PH值的碱的胁迫作用,使作物对矿质元素利用性明显降低。目前已经开展对盐碱地的综合治理工作,而培育耐盐碱作物品种是最直接,最有效的措施之一。野生大豆是栽培大豆的近缘野生种,它具有极强的抗逆性和丰富的遗传多样性,挖掘筛选野生大豆的耐盐基因,对大豆转基因育种和分子设计育种具有重要的意义。基因表达谱芯片（Gene expression profiling）可以高通量的分析基因mRNA表达量,发现重要基因,了解代谢途径,解读代谢机制,利用表达谱芯片进行功能基因组学研究也是目前最为活跃的研究领域之一。本实验以混合盐碱胁迫处理野生大豆幼苗,使用基因表达谱芯片检测盐碱胁迫应答基因的表达差异,克隆野生大豆的耐盐碱备用基因。并使用定量技术对基因表达进行了验证。胁迫后的野生大豆与对照相比,有5573个探针发生了2倍以上的表达变化,占全部芯片的9.1%,其中2833条表现为上调,2740条表现为下调。（1）对筛选出的差异表达基因进行生物信息学分析,按功能进行归类,可分为参与包括信号转导、表达调控、代谢、发育相关、转运类蛋白等几大类别及一些功能未知基因;（2）挑选表达上调为22.5类固醇类受体共作用酶基因（SRC2）,使用同源序列克隆法获得全长,长度为964bp,此序列编码291个氨基酸,分子重量为31118.25D,等电点PI为6.72,含有C2保守域（钙调素结合域）及跨膜拓扑结构。（3）Sorthern blot结果显示,类固醇受体共作用酶基因在基因组中拷贝数为一个。（4）Northern blot结果检测中显示,类固醇类受体共作用酶基因（SRC2）在混合盐碱胁迫下,转录激活活性随胁迫时间的增加而增强,在刺激6小时表达到高峰;盐胁迫下,转录激活呈现降低-增高-降低的趋势,1小时表达到高峰;4.0℃处理胁迫条件下,基因转录激活随时间的增强而增强,且在刺激12小时表达到高峰。结果证实了SRC2在渗透胁迫中基因均表现出诱导表达增强,很可能是一种渗透调节多效基因,对它的研究将深入下去。