论文摘要
目的:在前期工作的基础上,研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）处理不同分化程度的人胃癌细胞前后RORα蛋白表达变化情况,探讨RORα与DADS诱导人胃癌细胞分化的关系,为寻找其作用新靶点提供理论依据。方法:在倒置显微镜与普通光学显微镜下观察DADS处理前后体外培养的人胃癌细胞形态变化;采用免疫细胞化学、间接免疫荧光流式细胞术、Western blot分析RORα在人胃癌细胞中蛋白水平的表达;半定量RT-PCR检测RORα在人胃癌细胞中核酸水平的表达。结果:1.形态学观察发现,DADS处理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞24h后,部分细胞浮起、变圆,体积缩小,贴壁细胞形态大小较一致,核仁减少或消失,异型性减小,细胞间隙增大。2.免疫细胞化学结果显示,DADS处理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞24h后,RORα蛋白在细胞核呈强阳性表达,与对照组的阴性或弱阳性表达相比,明显上调。3.间接免疫荧光流式分析显示,DADS处理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞24h后, RORα蛋白表达百分率分别为9.0±1.20、7.4±1.32、26.0±0.14、5.3±1.32,与对照组6.0±1.20、4.4±0.8、12.4±0.02、5.0±0.29相比,有上调趋势,其中SGC7901和MGC803有统计学意义（P <0.01和P <0.05）。DADS处理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞24h后,RORα蛋白表达荧光强度分别为35.11±6.34、26.14±3.40、37.65±6.08、29.44±4.29,较对照组的13.90±1.80、9.6±2.88、15.32±4.08、13.45±3.81显著上调,差异有显著性（P <0.01或P <0.05）。4.半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24h后,RORα蛋白表达在SGC7901、MGC803细胞中的1.09±0.01、0.97±0.01较对照组的0.45±0.03、0.44±0.02显著上调（P <0.01）;在BGC823和MKN28细胞的1.01±0.02、0.91±0.01较对照组的0.68±0.01、0.72±0.01明显升高（P <0.05）。5.Western blot分析灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞8、12、24h后,RORα蛋白表达分别为0.71±0.03、0.69±0.01、0.80±0.02、0.79±0.01,0.87±0.01、0.86±0.01、0.93±0.01、0.88±0.02和1.31±0.01、1.14±0.04、1.44±0.03、0.96±0.02,较未处理组的0.32±0.01、0.43±0.01、0.38±0.01、0.68±0.02明显上调,差异有显著性（P <0.01或P <0.05）。结论:1.DADS可诱导人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MKN28细胞RORα蛋白表达上调。2.DADS可能通过上调RORα蛋白表达诱导人胃癌MGC803、BGC823、SGC7901、MNK28细胞分化。目的:通过组织芯片（tissue chip）检测胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中RORα蛋白表达,探讨RORα与胃癌的发生发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据。方法:应用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα蛋白的表达情况,研究RORα蛋白与胃癌发生发展的关系。结果:组织芯片制作结果:90例胃癌、48例癌旁胃黏膜与22例正常胃黏膜的组织芯片阵列设计合理,点阵排列整齐,常规切片HE染色证实每个组织点结构完整,组织形态良好,具有代表性,完全符合研究需要。免疫组化结果显示,胃癌组织中RORα蛋白表达下调。正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性表达率分别为83.36%（19/22）,56.25%（27/48）和24.44%（22/90）,三者相比有显著性差异（P <0.05）。不同组织学类型的胃癌组织中RORα蛋白阳性表达率不同,随胃癌组织分化程度下降呈现逐渐降低的趋势。在高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、粘液腺癌和印戒细胞癌中,RORα蛋白阳性表达率分别为45.00%（9/20）、27.59%（8/29）、14.29%（3/21）、9.05%（1/11）和11.11%（1/9）。高分化腺癌RORα蛋白阳性表达率高于低分化腺癌,其差异具有统计学意义（P <0.05）。结论:1.胃癌组织中RORα表达显著低于正常胃黏膜及癌旁胃黏膜,癌旁胃黏膜低于正常胃黏膜,提示RORα蛋白表达下调与胃癌的发生发展相关。2.高分化腺癌中RORα蛋白表达明显高于低分化腺癌,提示RORα蛋白可能与胃癌细胞的分化程度有关。