论文摘要
第一部分抗哇巴因多克隆抗体的制备目的:制备抗哇巴因多克隆抗体。方法:选择6只45月龄、体重为2～2.5公斤雄性健康日本大耳白兔,采用过碘酸钠氧化法偶联Ouabain和OVA/BSA合成Ouabain-OVA和Ouabain-BSA完全抗原。利用Ouabain-BSA完全抗原免疫日本大耳白兔制备哇巴因抗血清;采用饱和硫酸铵沉淀法联合DEAE-D52阴离子纤维素离子交换层析法纯化哇巴因多克隆抗体,经SDS-PAGE法检测抗体纯度, ELISA法检测抗体效价、分装或冷冻干燥-20℃保存备用。结果:过碘酸钠氧化法偶联合成的Ouabain-OVA和Ouabain-BSA完全抗原的偶联率分别为1:14和1:18; Ouabain-BSA完全抗原免疫日本大耳白兔获得的Ouabain抗血清经纯化后得到Ouabain多克隆抗体,其纯度高,效价为1:500。结论:过碘酸钠氧化法合成的Ouabain-BSA完全抗原能有效免疫日本大耳白兔获得Ouabain抗血清;序贯采用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE-D52阴离子纤维素离子交换层析法纯化Ouabain抗血清能获得高纯度、高效价的Ouabain多克隆抗体。第二部分内源性哇巴因与妊娠期高血压疾病的相关性研究目的:通过观察内源性哇巴因（EO）在不同病程妊娠期高血压疾病（HDCP）患者胎盘组织中的表达以及在孕妇外周血和新生儿脐血中的水平变化,证实EO在胎盘组织中的表达及其在血清中的水平与HDCP发生发展的相关性,并初步探讨胎儿-胎盘分泌EO的可能性。方法:选择30例正常晚期妊娠妇女为对照组,30例HDCP患者为病例组;病例组分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组,每组10例。采用免疫组织化学S-P法、免疫荧光组织化学染色法（IFH）观察EO在胎盘组织的表达;采用竞争性ELISA法检测孕妇外周血和新生儿脐血中EO的水平。结果:①病例组各组EO在胎盘组织的表达明显高于对照组（P<0.01）,且随着病程的加重,EO的表达逐渐增强（P<0.01）;②病例组孕妇外周血/新生儿脐血的EO水平显著高于对照组,并且随着疾病的发展,EO的含量逐渐增加（P<0.01）;③新生儿脐血EO水平均显著高于产前孕妇外周血（P<0.01）,且孕妇外周血EO水平在产后第三天明显降低（P<0.01）。结论:EO在HDCP患者胎盘组织中的表达明显增强,且其表达强度与病程的发展呈明显的正相关;孕妇外周血及新生儿脐血中EO水平显著升高,与病程的发展亦呈明显的正相关,产后3天孕妇外周血中EO水平明显下降。提示:EO直接参与了妊娠高血压疾病的病理调控。此外,本研究还显示,各组新生儿脐血中EO水平均明显高于孕妇外周血EO水平,提示:胎儿-胎盘单位可能分泌EO,加剧孕妇外周血EO水平的升高,共同参与妊娠高血压疾病的病理调控过程。第三部分内源性哇巴因在妊娠高血压疾病发生发展中的病理调控机制研究目的:探讨EO在HDCP中的病理调控机制。方法:选择30例正常晚期妊娠妇女为对照组,30例妊娠高血压疾病患者为病例组;病例组分为妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组,各组10例。采用S-P法、免疫荧光组织化学染色法（IFH）观察EO受体Na+/K+ ATPase-α1 subunit （NKA-α1）在胎盘组织中的表达,同时采用定磷法检测孕妇外周血红细胞Na+/K+ ATPase （NKA）的活性;硝酸还原酶法、ELISA法分别检测孕妇外周血和新生儿脐血中NO和ET-1的水平。结果:①病例组各组EO的受体NKA-α1在胎盘组织的表达显著低于对照组,且随着疾病的发展,表达强度逐渐减弱（P<0.01）。②病例组各组孕妇外周血红细胞膜NKA活性显著低于对照组,且随着疾病的加重,其活性逐渐减弱（P<0.01）。③病例组孕妇外周血/新生儿脐血的ET-1水平显著高于对照组（P<0.01）;而NO水平明显低于对照组（P<0.01）。此外,病例组和对照组的脐血ET-1水平均显著高于孕妇外周血（P<0.01）,而NO水平则明显低于孕妇外周血（P<0.01）。④结合前期实验结果,EO的表达强度、孕妇外周血血清EO的水平均与NKA-α1的表达强度、孕妇外周血红细胞膜NKA活性呈负相关（P<0.01）;本研究同时还证实EO表达强度、孕妇外周血血清EO的水平均与ET-1呈正相关（P<0.01）,与NO呈负相关（P<0.01）。结论:EO的受体NKA的活性及其α1亚基在妊娠高血压疾病患者胎盘组织中的表达随着疾病的加重而降低,且EO的表达及血清EO水平与ET-1/NO的失衡有显著的相关性,提示:EO一方面可能通过抑制NKA-α1的表达以及NKA的活性参与妊娠高血压疾病的发生发展,另一方面则通过影响血管内膜ET-1/NO的分泌表达导致或进一步加剧血管内膜ET-1/NO的失衡参与妊娠高血压疾病的病理调控。
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- [4].孕期吸烟影响外周血游离DNA水平[J]. 中国产前诊断杂志(电子版) 2008(01)
- [5].孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与妊娠高血压综合征的关系[J]. 中国优生与遗传杂志 2008(08)
- [6].孕妇外周血糖化血红蛋白检测在妊娠期糖尿病诊断中价值分析[J]. 内蒙古医学杂志 2017(04)
- [7].可溶性人类白细胞抗原G与子痫前期的关系[J]. 潍坊医学院学报 2014(03)
- [8].孕妇外周血胎儿有核红细胞检测与优生优育[J]. 河北医科大学学报 2013(02)
- [9].妊娠期孕妇外周血微量元素检测及其临床意义[J]. 中国卫生检验杂志 2014(15)
- [10].子痫前期孕妇外周血与脐血血管内皮生长因子的表达及意义[J]. 右江民族医学院学报 2013(03)
- [11].雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞动员作用的体外研究[J]. 中国医药生物技术 2008(03)
- [12].探讨孕妇外周血糖化血红蛋白检测在妊娠期糖尿病诊断中的临床应用价值[J]. 世界最新医学信息文摘 2016(83)
- [13].孕妇外周血胎儿ε血红蛋白基因mRNA的表达及与孕龄的相关性[J]. 中国全科医学 2014(07)
- [14].孕妇外周血糖化血红蛋白检测在妊娠期糖尿病诊断中的临床应用[J]. 基层医学论坛 2017(20)
- [15].子痫前期孕妇外周血辅助性T细胞和自然杀伤细胞的表达水平分析[J]. 陕西医学杂志 2011(06)
- [16].异常妊娠孕妇外周血中胎儿细胞的数量研究[J]. 中国优生与遗传杂志 2009(09)
- [17].利用孕妇外周血可检测胎儿性别[J]. 中国产前诊断杂志(电子版) 2008(01)
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- [19].一种提高孕妇外周血中游离胎儿DNA产量的新方法[J]. 山西医药杂志 2014(17)
- [20].孕妇外周血中胎儿DNA检测及临床应用[J]. 中国妇幼保健 2009(06)
- [21].孕妇年龄、孕周及体重指数对孕妇外周血中胎儿游离DNA比例的影响[J]. 中国产前诊断杂志(电子版) 2017(03)
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- [28].正常妊娠孕妇外周血中CD4+CD25+T细胞比例的变化[J]. 河南大学学报(医学版) 2008(03)
- [29].胎儿生长受限孕妇外周血及新生儿脐血中内皮祖细胞数量与功能的变化[J]. 武汉大学学报(医学版) 2011(01)
- [30].荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究[J]. 中国计划生育学杂志 2010(02)
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