肠炎对GABA兴奋大鼠结肠肌条收缩活动的影响

论文摘要

γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）作为一种抑制性神经递质,广泛地分布于人和动物的中枢神经系统。GABA受体有GABAA、GABAB和GABAc三种亚型,免疫组织化学和原位杂交方法研究提示大鼠的消化道中这三种类型的受体都表达。外源性GABA可以影响消化道的运动和分泌等功能,这些作用绝大多数是由肠神经丛（enteric nervous system,ENS）上的GABA受体介导的。因此可以推测,GABA也是ENS内一种重要的神经递质。由于动物种属差异和作用部位不同等原因,不同研究组报导的有关GABA影响胃肠道活动的结果并不一致。痢疾是由痢疾杆菌引起的感染性胃肠疾病,可引起急性和重症腹泻。肠道炎症会诱发肠神经系统的结构和功能发生可塑性改变,病人出现长期的肠道运动感觉和功能紊乱,甚至表现为炎症后肠易激综合症（Post Infectious Irritable Bowel Syndrome,PI-IBS）,但机制不清。作为一种重要的神经递质,ENS内GABA调节消化道的功能是否会受到肠道炎症的影响未见报导。本研究采用胃内灌注痢疾杆菌的方式制作大鼠痢疾模型,观察肠道炎症对ENS内GABA调节消化道运动作用的影响,并初步探讨其机制。实验选用健康雄性Wistar大鼠,胃内灌注福氏痢疾杆菌的方式制备痢疾模型。在痢疾后不同时间牺牲大鼠,制备远端结肠环形肌肌条,在灌流肌槽中孵育并记录肌条自发收缩活动。以平滑肌肌条张力变化为指标,观察GABA对结肠远端环形肌运动的影响,用Western blot技术测定肠炎前后结肠GABA受体蛋白表达量的变化。所有数据均采用均数±标准误表示,采用单因素方差分析进行统计学处理,以P＜0.05为显著性差异界值。实验结果如下:1.外源性GABA引起结肠远端环形肌的收缩增强,或者诱发双向反应,即在短暂的舒张后伴随一明显的收缩增强。GABA兴奋结肠运动的作用在浓度为100μmol/l—10 mmol/l间呈明显的剂量—反应关系,GABA浓度为10μmol/l时不影响肌条的自发收缩。2.GABAA受体激动剂muscimol（100μmol/l）明显兴奋结肠收缩,结肠张力在加药后迅速增高并在1分钟内达到最高点。GABAB受体激动剂baclofen（100μmol/l）不影响结肠收缩。3.GABAA受体拮抗剂bicuculline（10μmol/l）和电压依赖性Na+通道阻断剂河豚毒素（tetrodotoxin,TTX,10μmol/L）均完全拮抗GABA对雄性大鼠结肠远端环形肌运动的兴奋作用。4.用福氏志贺菌灌胃制备大鼠痢疾模型,结肠组织切片发现在灌胃后第10天炎症最强烈,第14天下降,至第21天恢复正常;反应组织炎性细胞浸润水平的髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性也在第10天达到最高,21天及其以后恢复正常。5.肠炎后第10天GABA对结肠远端环形肌收缩的兴奋作用降低70%,且在第14—45天仍然保持低水平。6.Western blot发现在痢疾后第10天,结肠GABAARa1蛋白表达量明显下降,第14天及其以后均恢复正常。结肠中未检测到GABABR1蛋白表达。7.氨甲酰胆碱（carbachol）对结肠远端环形肌收缩的兴奋作用在肠炎后第32及45天与正常大鼠相比没有明显改变。实验结果表明:1.外源性GABA通过ENS内GABAA受体兴奋大鼠远端结肠的环形肌收缩。2.肠炎后GABA兴奋结肠远端环形肌收缩的作用受到长时间（＞30天）抑制。3.肠炎后GABA这种作用的长时间（＞30天）改变不是由于结肠GABAA受体表达下降或结肠收缩性能下降引起的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词和中文对照
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 总结
• 附录
• 参考文献
• 致谢
• 学位论文评阅及答辩情况表