论文摘要
目的：本研究的目的是探索电针促进骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)分化为神经细胞的可行性；通过观察电针联合BMSCs移植对大鼠急性脊髓损伤神经功能恢复的影响，探讨其作用的可能机制。方法：1．实验动物及分组SD健康幼鼠8只，体重约100g左右，雌雄不限，用来进行BMSCs原代培养。SD健康成年大鼠72只，体重250～350g，雌雄不限，随机分为四组：(1)PBS组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射PBS；(2)BMSC组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射5一溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记的BMSCs；(3)电针组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后24h进行电针治疗；(4)电针BMSC组(电针与BMSC移植联合应用)：18只，受损脊髓移植BrdU标记过的BMSCs后24h进行电针治疗。以上各组分为3d、7d、14d三个时相点。2．指标检测(1)体外分离培养BMSCs，镜下进行细胞形态学观察；(2)移植后3天、7天、14天，应用CBS评分法评价治疗前后损伤大鼠神经功能改善状况。(3)移植后3天、7天、14天，应用原位杂交方法检测损伤大鼠脊髓NGFmRNA表达变化情况。(4)于移植后第14天应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs的神经元烯醇化酶(NSE)表达情况。结果：1．BMSCs的原代和传代培养：原代细胞呈集落趋势贴壁生长，分布不均匀。接种10天左右，细胞融合达90％以上，此时进行传代培养。传代后细胞增殖迅速，7天左右细胞即融合。传代后的细胞生长均匀，大部分呈长梭形。2．各时相点的各组动物神经功能均有不同程度的恢复。BMSC组、电针组与PBS组比较神经功能评分有显著性差异(P＜0.05)；电针BMSC组与PBS组比较有非常显著性差异(P＜0.01)；而电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较，神经功能恢复的更好，评分亦有显著性差异(P＜0.05)；而BMSC组和电针组比较无显著性差异(P＞0.05)。3．BMSC组与电针组损伤脊髓NGFmRNA表达较PBS组有明显增加(P＜0.05)；电针BMSC组较PBS组表达增加更为明显(P＜0.01)；电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较NGFmRNA的表达亦有明显增加(P＜0.05)；电针组与BMSC组比较无显著性差异(P＞0.05)。4．BMSCs移植14d后，BrdU标记的阳性细胞表达NSE的百分率分别为：BMSC组为7.2％；电针BMSC组为7.9％。结论：BMSCs移植后可在宿主体内存活并分化为神经细胞；电针促进移植的BMSCs在体内分化为神经细胞，以及电针与BMSCs移植联合应用，改变脊髓损伤区的微环境，是减少脊髓继发性损伤，促进其功能恢复的可能机制。