内蒙古地区草地螟白僵菌的生物学特性及遗传多样性研究

论文摘要

本试验以采自内蒙古兴安盟、乌兰察布-呼和浩特市、鄂尔多斯市的罹病致死的草地螟幼虫为材料,从生物学特性和遗传多样性的角度进行了研究。研究结果如下:1从材料中分离得到17株昆虫病原真菌菌株:Bb-D01-Bb-D04,Bb-S01-Bb-S06,Bb-Y01-Bb-Y07。对17株菌株进行了形态学鉴定,确定为半知菌亚门（Deuteromycotina）丝孢纲（Hyphomycetes）,丛梗孢目（Maniliales）丛梗孢科（Moniliaceae）,白僵菌属（Beauveria）,球孢白僵菌（Beauveria bassiana）。对17株菌株分别作了活性检测,结果表明:17株菌株对草地螟白僵菌的杀虫活性均较高,从而说明草地螟幼虫为其寄主之一。2在碳氮源试验中,分别选取4种不同的碳源和氮源（无机碳源和无机氮源各一种）以及12种不同碳氮比进行了试验。结果表明:单糖、多糖对17株菌株的菌丝生长和产孢量均有影响,葡萄糖作为碳源时菌丝生长最快,产孢量最高,无机碳源（碳酸钠）作为碳源时菌株吸收利用效果不佳,部分菌株对无机碳源（碳酸钠）不能吸收利用。在氮源试验中,4种不同氮源均能被很好的吸收利用,其中酵母浸粉效果最佳。在碳氮比试验中,当C:N=40:8时菌丝生长和产孢量最佳。对比例相同的配方来说,影响球孢白僵菌菌丝生长和产孢量的因素取决于各个配方中碳源和氮源的含量而不是碳氮源的比例。3本试验应用ISSR（简单重复序列间隔区）标记对在内蒙古兴安盟、乌兰察布-呼和浩特市、鄂尔多斯市3个地区采集的17株白僵菌菌株进行遗传多样性分析,探讨了白僵菌不同地区之间和每个地区内部的遗传多样性,获得了如下结果:1)对21个ISSR引物进行了筛选,获得了15个ISSR引物,这些引物进行PCR扩增均可获得清晰的DNA条带,且多态性较高。本试验还确立了ISSR的最佳反应体系,在该反应体系下,均可以获得清晰的图谱。2)在ISSR实验中,15个ISSR引物共扩增出90条带,多态位点百分率（PPL）为96.67%。总的Nei’s基因多样性指数（H）为0.4309 ,Shannon’s信息多样性指数（I）为0.6106。在群体间的遗传相似度的聚类分析中,乌兰察布-呼和浩特市和鄂尔多斯市地区的遗传一致度最高为0.9897,兴安盟地区和鄂尔多斯市地区的遗传一致度最低为0.9601。

论文目录

• 项目来源
• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 虫生真菌资源概述
• 1.2 白僵菌的研究历程
• 1.3 白僵菌的生物学特性
• 1.3.1 白僵菌的形态特征
• 1.3.2 营养条件对白僵菌生长的影响
• 1.4 白僵菌的遗传多样性
• 1.4.1 遗传多样的概述
• 1.4.2 DNA 分子标记的概述
• 1.4.3 DNA 分子标记的种类
• 1.4.4 ISSR 分子标记的选择依据
• 1.5 草地螟的概述
• 1.6 研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 病原真菌的分离及鉴定
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 仪器和器皿
• 2.1.3 试验方法
• 2.1.3.1 马铃薯琼脂培养基（PDA）配制方法
• 2.1.3.2 病原真菌的分离
• 2.1.3.3 病原真菌的鉴定
• 2.1.3.4 病原真菌的纯化
• 2.1.3.5 病原真菌的活性检测
• 2.2 营养条件对白僵菌生物学特性的影响
• 2.2.1 供试材料
• 2.2.2 主要药品及仪器
• 2.2.3 供试培养基
• 2.2.3.1 基础培养基
• 2.2.3.2 供试培养基
• 2.2.4 试验方法
• 2.2.4.1 接种与培养
• 2.2.4.2 孢子悬浮液的配制
• 2.2.4.3 萌发率的测定
• 2.2.4.4 菌落生长的测量
• 2.2.4.5 产孢量的测定
• 2.3 草地螟白僵菌不同居群遗传多样性的ISSR 分析
• 2.3.1 供试材料来源
• 2.3.2 仪器及试剂
• 2.3.3 试验方法
• 2.3.3.1 主要试剂配制方法
• 2.3.3.2 基因组DNA 的提取
• 2.3.3.3 琼脂糖凝胶电泳
• 2.3.3.4 引物筛选
• 2.3.3.5 ISSR-PCR 扩增反应及检测
• 2.4 数据统计
• 2.4.1 生物学特性数据统计
• 2.4.2 遗传多样性指标
• 2.4.3 遗传多样性指标的计算
• 3 结果与分析
• 3.1 病原菌的分离与鉴定
• 3.1.1 感病虫体症状
• 3.1.2 病原菌的鉴定
• 3.1.3 病原菌的活性检测
• 3.2 营养条件对白僵菌生物学特性的影响
• 3.2.1 不同碳源对各菌株生长指标的测定
• 3.2.2 不同氮源对各菌株生长指标的测定
• 3.2.3 不同碳氮比对各菌株生长指标的测定
• 3.3 草地螟白僵菌不同居群遗传多样性的ISSR 分析
• 3.3.1 白僵菌总基因组DNA 提取结果
• 3.3.2 ISSR 扩增产物的多态性分析
• 3.3.3 群体遗传变异与遗传多样性
• 3.3.4 遗传一致度与遗传距离分析
• 3.3.5 个体间的聚类分析
• 4 讨论
• 4.1 球孢白僵菌的分离与鉴定
• 4.2 营养条件对球孢白僵菌生物学特性的影响
• 4.3 草地螟白僵菌不同居群遗传多样性的ISSR 分析
• 5 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附表
• 作者简介
• 导师简介